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分子生物學試劑
PCR相關(guan)
2×Lab FL PCR Master Mix
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | FL0201 |
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供貨周期 | 現貨 |
2×Lab FL PCR Master Mix
產(chan) 品貨號:FL0201
儲(chu) 存條件:-20°C 保存2年。短時間(1個(ge) 月內(nei) )使用可以置4°C。
產(chan) 品說明
本產(chan) 品包含Lab LastLong DNA Polymerase、dNTPs和優(you) 化的反應緩衝(chong) 液,濃度為(wei) 2×。 使用時隻需加入模板、引物,並補足水至Mix終濃度為(wei) 1×即可。本製品含紅色示蹤染料,不需添加上樣緩衝(chong) 液即可直接上樣進行電泳;也可經過純化處理,以用於(yu) 酶切、連接、熒光測序等後續操作。PCR產(chan) 物為(wei) 3,端帶A頭,純化後可直接用LABLEAD LabpO TOPO TA係列載體(ti) (貨號:PA0101、PA0102)克隆。
產(chan) 品特點
1、超快的擴增速度:延伸速度可以達到5-10sec/kb,最短半小時完成PCR。
2、突出的長片段擴增能力:可擴增高達10kb的長片段(包括人類基因組此類的複雜模板)。
3、良好保真性:保真度是taq的3倍以上。
4、強大的擴增能力:產(chan) 量高,對於(yu) 一些有特殊結構的複雜模板和GC含量高模板有良好效果。
建議PCR 體(ti) 係設置
Component | 25 μl Reaction | 50 μl Reaction | Final Concentration |
2x Lab FL PCR mix | 12.5 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
ddH2O | up to 25 μl | up to 50 μl |
參考模板用量(50 μl反應體(ti) 係)
質粒:0.1-10ng;細菌基因組:10-100ng;人類基因組:50-150ng;cDNA:1-5μl from RT reaction。
建議PCR循環條件
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94oC | 2-3 min | |
Denaturation | 94oC | 10 s | 25-35 cycles |
Annealing | 55oC | 10-15s | |
Extension | 72oC | 10 s/ kb | |
Final Extension | 72oC | 1-5 min | |
4-8oC | Hold |
注意事項
1.本品擴增速度極快, 質粒和簡單基因組等簡單模板可以嚐試5s/kb延伸速度並采用減少循環數以進一步縮短PCR時間;長片段(大於(yu) 等於(yu) 3kb)或者複雜模板產(chan) 量較低應采用15-20s/kb延伸速度或者采用較多循環數。
2.Lab FL產(chan) 量較低時可嚐試采用較長的延伸時間(如20s/kb)和循環數(如35個(ge) )可以提高產(chan) 物產(chan) 量。
3.對於(yu) GC含量很高的模板,短片段預變性和變性溫度可以提高到98 oC和/或適當延長變性時間。長片段為(wei) 了避免DNA損傷(shang) 不應該提高變性溫度,應該適當延長預變性時間到5min.,變性時間可以延長5-10s。
4.如果擴增模板GC含量高或者模板複雜擴增效果不佳時,可在反應混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%,按照1%梯度增加摸索best濃度。或者加入甜菜堿至終濃度1.0-1.7 M。並采用降落PCR(Touchdown PCR)