M-MLV GIII 反轉錄酶(三代）是通過基因修飾和重組技術獲得的第三代M-MLV逆轉錄酶。該酶相對於野生型M-MLV逆轉錄酶去除了RNase H活性，並大幅提高了熱穩定性（the best反應溫度為50℃），從而大大提高了合成first鏈cDNA時的特異性和長度（最長可達12 kb），增強了對RNA複雜二級結構的耐受性。

貨號：M5124

儲(chu) 存條件：-20℃

產(chan) 品組成

產(chan) 品簡介

M-MLV GIII Reverse Transcriptase是通過基因修飾和重組技術獲得的第三代M-MLV逆轉錄酶。該酶相對於(yu) 野生型M-MLV逆轉錄酶去除了RNase H活性，並大幅提高了熱穩定性（the best 反應溫度為(wei) 50℃），從(cong) 而大大提高了合成first鏈cDNA時的特異性和長度（最長可達12 kb），增強了對RNA複雜二級結構的耐受性。

酶活單位定義(yi)

37℃條件下，以Poly(A)-Oligo(dT)為(wei) 模板/引物，在10 min內(nei) ， 摻入1 nmol的[³H] dTTP所需要的酶量定義(yi) 為(wei) 1個(ge) 活性單位（U）。

質量控製

宿主原性DNA檢測

無宿主DNA汙染

核酸內(nei) 切酶殘留檢測

將酶液與(yu) 超螺旋質粒DNA在37℃溫育4h，通過DNA電泳檢測質粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測

將酶液與(yu) 雙鏈DNA底物在37℃溫育16h，通過DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

使用方法

質粒載體(ti) 線性化與(yu) 去磷酸化同步反應流程

1. 於(yu) 冰上配製如下反應體(ti) 係：

2. 輕柔吸打混勻後，瞬離；a. 推薦使用試劑盒提取的已去除基因組DNA汙染的高質量RNA作為(wei) 模板。

3. 若使用Oligo(dT)₂₀或基因特異性引物，50℃溫育30 min；若使用隨機引物，先25℃溫育5 min，之後50℃溫育30 min；

注：若目的cDNA小於(yu) 3 kb，溫育時間可縮短為(wei) 15 min。

4. 反應結束後，85℃溫育5 min 以終止反應；

5. 將獲得的 cDNA 溶液置於(yu) 冰上，用於(yu) 後續實驗。

注：cDNA 溶液置於(yu) -20℃可保存半年；置於(yu) -80℃可長期儲(chu) 存