M-MuLV Reverse Transcriptase反轉錄試劑通過基因重組技術克隆表達的點突變型 RNase H 活性缺失的 M-MuLV 反轉錄酶 TRUEscript Hˉ RTase。

M-MuLV Reverse Transcriptase

產(chan) 品貨號：M2000

儲(chu) 存條件：-20℃

濃度：200 units/μl

製品說明

本製品使用通過基因重組技術克隆表達的點突變型 RNase H 活性缺失的 M-MuLV 反轉錄酶 TRUEscript Hˉ RTase。野生型的 M-MuLV 包含的 RNase H 活性能夠催化降解 DNA/RNA 雜合體(ti) 中的 RNA， 因 此 在 cDNA First-Strand 的合成反應中可能會(hui) 降解 RNA/DNA 雜合體(ti) 中的模板 RNA。本酶 M-MuLV(RNase Hˉ)的 RNase H 活性缺失，與(yu) M-MuLV 相比，具有更強的延伸能力和穩定性，可用於(yu) 較長的 cDNA 合成以及高比例的全 長 cDNA 文庫的構建等。  

適用範圍：First-Strand cDNA 合成。可用於(yu) 低拷貝基因的檢測。

特點：合成 cDNA 片段長度可達 12 kb。

First-Strand cDNA 合成(以 20 μl 反應體(ti) 係為(wei) 例)

1、加入

2、輕輕混勻

如用 Oligo(dT)18 或基因特異引物(GSP)，42℃孵育 30-50min。

如用 Random Primer，25℃孵育 10 min，42℃孵育 30-50 min。

3、65℃加熱 15 min(或者 85℃加熱 5 min)失活 TRUEscript Hˉ RTase。

RT-PCR

建議取 1/10-1/5 體(ti) 積(2-4 μl)的反轉錄產(chan) 物作為(wei) PCR 模板。

建議 PCR 條件(以 50 μl 反應體(ti) 係為(wei) 例)

PCR 循環

注意事項

1.避免 RNase 汙染。

2.為(wei) 保證反轉錄成功建議使用高質量的 RNA 樣品。

3.如果 RNA 模板 GC 含量豐(feng) 富或者有複雜二級結構，可以先隻加 RNA 模板、引物和和 RNase free H2O 混勻， 65℃變性 5 分鍾，冰上冷卻，短暫離心後加入其它成分繼續下麵的反轉錄步驟。

4.TRUEscript Hˉ RTase 非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸頭外導致損失，用前請點甩離心後使用，並且避免吸頭外壁沾附損失。可以每次按照 0.8μl使用，也不影響使用效果。

5.為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

6、本品僅(jin) 用於(yu) 實驗研究。