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分子生物學試劑
反轉錄相關(guan)
反轉錄試劑盒(三代酶,獨立引物)
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | F0202O |
---|---|---|---|
規格 | 100T | 供貨周期 | 現貨 |
反轉錄試劑盒(Primer Flexible)
產(chan) 品貨號:F0202O
存儲(chu) 條件:-20°C
產(chan) 品組分:
組分 | 規格 |
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix | 400 μl |
Oligo(dT)20VN (50 μM) | 100 μl |
Random hexamers (50 μM) | 100 μl |
Nuclease-Free Water | 2×1 ml |
產(chan) 品簡介
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix是一款高效、便減少汙染的高質量一鏈cDNA合成預混液, 包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反應 Buffer、RNA 酶抑製劑、dNTPs等一鏈 cDNA 合成所需的多種組分,還需加入RNA 模板、引物和水即可開始反應,操作非常方便。針對不同實驗設計可靈活使用不同類型的逆轉錄引物,滿足多樣化的實驗需求,可根據不同實驗場景選擇Oligo(dT)20VN 或Random hexamers 或 Gene Specific Primers。使用該逆轉錄預混液 15 分鍾內(nei) 最長可獲得12 kb大小的cDNA。
使用方法
1.於(yu) 冰上配製如下反應體(ti) 係:
試劑 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
RTase III Primer Flexible All-in-One Mix | 4 μl |
Oligo(dT)20VN (50 μM) | 1 μl |
或 Random hexamers (50 μM) | 1 μl |
或 Gene Specific Primers (50 μM) | 0.1 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a.推薦使用試劑盒提取的已去除基因組 DNA 汙染的高質量 RNA 作為(wei) 模板。
2.輕柔吸打混勻,瞬離;
3.55℃溫育 15 min;
注:若目標 RNA 不含 Poly(A) 結構,可預先 25℃溫育 10 min。
4.反應結束後,85℃溫育 5 min 以終止反應;
5.將獲得的cDNA 溶液置於(yu) 冰上,用於(yu) 後續實驗;或立即保存於(yu) -20℃。
注:
1.後續實驗為(wei) 克隆實驗,若RNA 來源於(yu) 真核生物,隻需使用 Oligo (dT) VN 即可, 加入 Random hexamers 會(hui) 降低全長 cDNA 的產(chan) 量;若 RNA 來源於(yu) 原核生物,隻需使用 Random hexamers 或 Gene Specific Primers。
2.後續實驗為(wei) qPCR,請同時加入Oligo(dT) VN和Random hexamers以獲得mRNA不同位置逆轉錄效率均一的cDNA。
注意事項
為(wei) 了防止 RNase 汙染,請保持實驗區域潔淨;操作時需穿戴幹淨的手套、口罩;實驗所用的離心管、槍頭等耗材均需保證 RNasefree。