All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)

貨號：F0202

儲(chu) 存條件：-20℃

產(chan) 品簡介：

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix是一款高效、便捷、減少汙染的高質量一鏈cDNA合成試劑盒，包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反應Buffer、RNA酶抑製劑、dNTPs, Oligo(dT)₂₀VN和隨機引物等一鏈cDNA合成所需的所有組分，僅(jin) 需加入RNA模板和水即可開始反應。使用該逆轉錄試劑盒獲得的cDNA，下遊可用於(yu) qPCR、普通PCR等實驗。

本試劑盒采用dsDNase高效去除基因組DNA汙染，區別於(yu) 常規的DNase l, dsDNase 能夠特異性的消化雙鏈DNA (dsDNA以及DNA與(yu) RNA的雜合鏈)，並且具有熱敏感性，可在高溫條件下快速不可逆地失活。與(yu) 傳(chuan) 統使用DNase l去除基因組DNA汙染的方法相比，dsDNase無需額外加入EDTA進行失活，不僅(jin) 節省實驗時間，而且降低了對逆轉錄反應的抑製。All-in-OneFirst-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)作為(wei) 升級後的一鏈cDNA合成試劑盒，15分鍾內(nei) 最長可獲得12 kb cDNA。

可依據基因組汙染嚴(yan) 重程度選擇采用去基因組DNA汙染與(yu) 反轉錄分開進行的操作方法，或者去基因組汙染與(yu) 反轉錄一步法進行的操作方法。

使用方法：

針對基因組含量低的RNA樣品(推薦方案)

①於(yu) 冰上配製如下反應體(ti) 係：

a. 推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為(wei) 模板

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 37℃溫育2min，以去除基因組DNA汙染；

④ 55℃溫育15 min;

⑤ 反應結束後，85℃溫育5 min以終止反應;注：若RNA中基因組DNA汙染嚴(yan) 重，可適當延長37℃溫育時間至5 min。

⑥ 迅速將獲得的 cDNA置於(yu) 冰上，用於(yu) 後續實驗;或立即保存於(yu) -20°C。

針對基因組含量高 RNA 樣品

1. 基因組 DNA 汙染去除

①於(yu) 冰上配製如下反應體(ti) 係：

a. 推薦采用試劑盒提取的RNA作為(wei) 模板。

② 輕柔吸打混勻，瞬離;

③ 37°℃溫育2 min，以去除基因組DNA汙染;

注:若RNA中基因組DNA汙染嚴(yan) 重，可適當延長37℃溫育時間至5 min。

④ 65℃溫育2 min，使dsDNase失活，冰上放置。

2. First-Strand cDNA合成

① 於(yu) 冰上配製如下反應體(ti) 係：

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 50℃溫育15min；

注：若目標RNA不含Poly(A)結構，可預先25℃溫育10min。

④ 反應結束後，85℃溫育5min，以終止反應；

⑤ 將獲得的 cDNA 溶液置於(yu) 冰上，用於(yu) 後續實驗。

注：cDNA溶液置於(yu) -20℃儲(chu) 存，建議不超過1周；置於(yu) -80℃可長期儲(chu) 存。

注意事項

預混液中已經包含Oligo(dT)₂₀VN和隨機引物，不僅(jin) 適用於(yu) 包含Poly(A)結構的真核生物mRNA，也適用於(yu) 不含Poly(A)結構的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用於(yu) miRNA等小RNA模板。