2x Realab Green PCR Fast mixture通用型，為2×預混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時間，降低汙染幾率。

Taq SYBR® Green qPCR Premix (通用型)

產(chan) 品貨號：R0202

儲(chu) 存條件：長期保存請於(yu) -20℃避光保存，Mix 融解後可在 4℃避光條件下穩定存放一個(ge) 月，盡量避免反複凍融。

2x Realab Green PCR Fast mixture通用型產(chan) 品簡介

Taq SYBR® Green qPCR Premix 是 SYBR® Green I 嵌合染料法專(zhuan) 用qPCR試劑，為(wei) 2×預混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時間，降低汙染幾率。其核心組分是經抗體(ti) 修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶，配合精心優(you) 化的Buffer體(ti) 係以及PCR反應促進因子，使產(chan) 品具有特異性強、擴增效率高等特點，有效抑製非特異性擴增，可對寬廣濃度範圍的模板進行準確定量，獲得穩定可靠的qPCR結果。

2x Realab Green PCR Fast mixture通用型使用方法：

1.適配機型

全機型通用

2.使用注意

① 因Mix中預混有染料，其保存或反應體(ti) 係配製過程應避免強光照射；

② 使用前上下顛倒輕輕混勻Mix，請勿渦旋振蕩混勻，避免產(chan) 生過多氣泡。

3.建議的qPCR反應體(ti) 係

a.調通推薦的引物終濃度為(wei) 0.2uM，反應效果不佳時可在0.1~1uM範圍內(nei) 進行調整;

b.推過薦模板加樣量的為(wei) 1~2ul，如模板類型為(wei) 未稀釋cDNA原液，模板添加量不應超過總反應體(ti) 係的10%，不同種類DNA模板中含有的靶基因拷貝數目不同，必要時可進行梯度稀釋，以確定必要的DNA模板添加量。

4.qPCR 反應程序（可根據機型適當調整）

兩(liang) 步法：

三步法：

a.根據引物的Tm值進行退火&延伸（退火）溫度的設定；若擴增片段在200bp以內(nei) ，退火&延伸（延伸）時間可以設置為(wei) 15sec;此外，退火&延伸（延伸）時間的設置還需根據您使用的qPCR儀(yi) 所需的最短數據采集時間自行調整；

b.不同 qPCR 儀(yi) 的熔解曲線采集程序有差別，一般可使用儀(yi) 器默認的熔解曲線采集程序。

5.實驗優(you) 化

若使用默認反應條件反應性能不佳時，則需要進行反應條件的優(you) 化，可以從(cong) 引物濃度以及擴增程序兩(liang) 個(ge) 方麵進行：

① 引物濃度調整

當引物終濃度在0.1~1.0uM範圍之間變化時，引物濃度越低，擴增特異性越高，但擴增效率會(hui) 有所下降。

② 擴增程序優(you) 化

需提高擴增特異性，可使用兩(liang) 步法程序或提高退火溫度；需提高擴增效率，可使用三步法程序或延長延伸時間。

6.引物設計原則

① 擴增產(chan) 物長度建議控製在80~200bp；

② 引物長度為(wei) 18~25bp；

③ 正向引物和反向引物的Tm值相差不超過 1℃為(wei) 佳，Tm值控製在58~62℃為(wei) 佳；

④ 引物的GC含量控製在 40%~60% 之間；

⑤ 引物A、G、C、T整體(ti) 分布盡量要均勻，避開T/C或者A/G的連續結構（特別是3'端）；

⑥ 引物3'端zuihou一個(ge) 堿基zuihao為(wei) G或者C；

⑦ 避開引物內(nei) 部或者兩(liang) 條引物之間的互補序列；

⑧ 使用NCBI BLAST功能檢索確認引物的特異性。