BspQI 限製性內(nei) 切酶

產(chan) 品貨號：F3503S

儲(chu) 存條件：-20℃

同裂酶：SapI, LguI, PciSI；（注： 同裂酶對於(yu) 不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。）

產品組成

產(chan) 品簡介

BspQI 屬於(yu) Type IIS 型限製酶，識別非回文序列，並在識別序列之外進行切割，常用於(yu) Golden Gate 組裝。經過優(you) 化的反應 Buffer

使 BspQI 最大限度發揮功能，同時反應緩衝(chong) 液包含重組白蛋白，其可增強多種酶的穩定性。

建議反應條件

1× HN 緩衝液；50℃溫育；參照“DNA 酶切流程"配製反應體係。

失活條件

80℃溫育 20 min。

活性定義(yi)

1 活性單位 (U) 是指在 50 μl 反應體(ti) 係中，50℃ 1 h 內(nei) wanquan酶切1 µg λDNA 所需的酶量

質量控製

超長時間溫育檢測

最適反應溫度下，將 10 U BspQI 與(yu) 1 μg λDNA 共同溫育 3 h，未檢測到其他核酸酶汙染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時

酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最適反應溫度下，使用 10 U BspQI 消化底物，回收酶切產(chan) 物。在 22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將酶切產(chan) 物重新連接。

將連接產(chan) 物再次回收後，使用相同的內(nei) 切酶可以重新切開連接產(chan) 物。

DNase 殘留檢測

將 10 U BspQI 與(yu) 雙鏈 DNA 底物在 37℃溫育 16 h，通過 DNA 電泳檢測雙鏈 DNA 底物無變化。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建議的加樣順序配製反應體係：

a. DNA 底物中應不含ben fen、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會(hui) 影響 BspQI 酶活性；

（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然後瞬時離心以收集掛壁液滴；

（3）50℃溫育 50min-1h；

（4）80℃溫育 20min 即可使酶失活，或者通過吸附柱或benfen / 氯仿純化終止反應。

2.注意事項

① 反應體(ti) 係中加入的酶體(ti) 積不應超過總體(ti) 積的 10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

② 限製性內(nei) 切酶存儲(chu) 緩衝(chong) 液中的添加劑 ( 例如甘油、鹽 ) 與(yu) 底物溶液中的汙染物 ( 例如鹽、EDTA 或乙醇等 ) 相同，反應體(ti) 積越小，酶切反應抑製效應越強。

不同 DNA 中的酶切位點數量

甲基化修飾影響