Sgel限製性內(nei) 切酶

產(chan) 品貨號：F1501S

儲(chu) 存條件：-20℃

SgeI 可識別與(yu) 切割含有 5-mC 位點的 DNA 靶標序列，一條鏈或雙鏈甲基化均可被識別。

產品組成

產(chan) 品簡介

LabFD™快速內(nei) 切酶是一係列經過基因工程重組、能夠在 5~15 分鍾內(nei) 精確完成 DNA 切割的高保真限製性內(nei) 切酶，適用於(yu) 質粒DNA、PCR 產(chan) 物或基因組DNA 等的快速酶切。LabFD™快速內(nei) 切酶具有如下特點：5~15 分鍾內(nei) 即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體(ti) 係；良好的酶活冗餘(yu) 度， 輕鬆應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體(ti) 驗。

酶活定義(yi)

在 1×SgeI Buffer 條件下，1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μl 反應體(ti) 係中37℃孵育1 h，不斷增加酶量，直至酶切產(chan) 物DNA帶型不隨著酶量的增加而發生變化，此時酶量定義(yi) 為(wei) 1 U。

質量控製

核酸內(nei) 切酶殘留檢測

將 3U Sgel 與(yu) 超螺旋質粒 DNA 在 37℃溫育 4 h，通過DNA電泳檢測質粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測

將 5U Sgel 與(yu) 雙鏈 DNA 底物在 37℃溫育 1 h，通過 DNA 電泳檢測雙鏈DNA 底物無變化。

注意事項

1. 底物至少需要 2 個(ge) SgeI 識別序列才能有效酶切。

2. 甲基化 DNA wanquan酶切取決(jue) 於(yu) SgeI 的識別位點的數量，另外由於(yu) 識別位點酶切產(chan) 生的DNA產(chan) 物會(hui) 促進SgeI

的非特異性酶切，因此建議酶切時優(you) 化SgeI酶量用於(yu) 酶切反應。

使用方法

 1. DNA 酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配製反應體(ti) 係：

注：反應體(ti) 係可以按比例放大或縮小。反應時間不建議超過 1 h。

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然後瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育1 h；

④ 80℃溫育 20 min即可使酶失活，停止反應（可選）。

  2.雙酶切或多酶切

每種快速內(nei) 切酶的用量為(wei) 1ul，並根據需要適當擴大反應體(ti) 係；

所有快速內(nei) 切酶的體(ti) 積總和不得超過總反應體(ti) 係的 1/10；

如果所用的幾種快速內(nei) 切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應溫度下進行酶切反應。

3.適用於(yu) 質粒的擴大反應體(ti) 係

注：如果總反應體(ti) 係大於(yu) 20ul，應適當增加溫育時間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

甲基化修飾影響