快速內切酶 MboI
同裂酶：Bsp143I, Kzo9I, BssMI, DpnII, BstKTI, BstMBI, Sau3AI，NdeII
注：同裂酶對於不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。



質量控製
功能活性檢測
37℃下，在20μl反應體係中，1μl LabFD™ MboI能夠在15min內wan全消化1μg λDNA (Dam-、Dcm-)。

HhaI 快速內(nei) 切酶

貨號：F4510S

儲(chu) 存條件：-20℃

同裂酶：HinP1I, CfoI, AspLEI, Hin6I, HspAI, BstHHI ；注：同裂酶對於(yu) 不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chan) 品組成：

產(chan) 品簡介：

LabFD™快速內(nei) 切酶是一係列經過基因工程重組、能夠在5~15分鍾內(nei) 精確完成DNA切割的高保真限製性內(nei) 切酶，適用於(yu) 質粒DNA、PCR產(chan) 物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nei) 切酶具有如下特點：5~15分鍾內(nei) 即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體(ti) 係；良好的酶活冗餘(yu) 度，輕鬆應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體(ti) 驗。

LabFD™ Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chan) 物直接用於(yu) 凝膠電泳。LabFD™ Color Buffer 的紅色染料與(yu) 2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與(yu) 10 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

建議反應條件：

1×LabFD™緩衝(chong) 液；37℃溫育；參照“DNA快速酶切流程"配製反應體(ti) 係

失活條件：80℃溫育 20 min。

質量控製

功能活性檢測

37℃下，在20μl反應體(ti) 係中，1μl LabFD™ HhaI能夠在15min內(nei) wan全消化1μg λDNA。

超長時間溫育檢測

37℃下，在20μl反應體(ti) 係中，將 1 μl LabFD™ HhaI與(yu) 1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測到其他核酸酶汙染或星號活性引起的底物非特異性降解。更長時間酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

37℃下，使用10倍酶量的 LabFD™ HhaI 消化 DNA 底物，回收酶切產(chan) 物，在22℃下使用 Fast T4 DNA Ligase可以將超過95% 酶切產(chan) 物重新連接。可以重新切開的酶切產(chan) 物重新連接。將連接產(chan) 物再次回收後，使用相同的內(nei) 切酶可以重新切開95% 以上的連接產(chan) 物。

使用方法

1. DNA 快速酶切流程

1) 在冰上按如下建議的加樣順序配製反應體(ti) 係：

 a注：本體(ti) 係適用於(yu) 經過純化的PCR產(chan) 物酶切，未純化的PCR具備一定的離子強度，10xLabFD^TMbuffer加入量可適當減少至2μl。但由於(yu) DNA聚合酶同時具有外切酶活性，會(hui) 影響酶切產(chan) 物，因此如下一步需進行克隆等操作，建議酶切前對PCR產(chan) 物進行純化。

2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然後瞬時離心以收集掛壁液滴；

3) 37℃溫育15min（質粒），或15~30min（PCR產(chan) 物），或30~60min（基因組DNA）；

4) 80℃溫育20min即可使酶失活，停止反應（可選）。

5) 如果使用LabFD™ Color Buffer進行酶切反應，得到的產(chan) 物可以直接進行上樣電泳。

2. 雙酶切或多酶切

1) 每種快速內(nei) 切酶的用量為(wei) 1μl，並根據需要適當擴大反應體(ti) 係；

2) 所有快速內(nei) 切酶的體(ti) 積總和不得超過總反應體(ti) 係的1/10；

3) 如果所用的幾種快速內(nei) 切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應溫度下進行酶切反應。

3. 適用於(yu) 質粒的擴大反應體(ti) 係

注：如果總反應體(ti) 係大於(yu) 20ul，應適當增加溫育時間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位點數量

甲基化修飾影響

在不同反應緩衝(chong) 液中的活性

注：活性數據來自LABLEAD限製酶標準反應體(ti) 係下的檢測。