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Product Center品牌 | LABLEAD | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 食品,化工,生物產業,農業,製藥 |
4XSDS分離膠緩衝(chong) 液(pH8.8)
產(chan) 品貨號 | 產(chan) 品名稱 | 規格 |
S4880 | 4XSDS分離膠緩衝(chong) 液(pH8.8) | 100ml,500ml |
保存:4℃。
產(chan) 品說明:
本試劑為(wei) 配製SDS-PAGE分離膠緩衝(chong) 液,可用於(yu) 配製各種濃度的變性PAGE凝膠,方便、快捷。產(chan) 品中已加入10%SDS,使用時不用另外加入。
操作步驟(僅(jin) 供參考):
根據目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配製濃度,最佳膠濃度請參考附表。
灌製分離膠(各試劑使用量請參考附表)
1、參照凝膠模具說明書(shu) ,裝配好凝膠模具。
2、將不同體(ti) 積的30%丙烯酰胺/甲叉29:1 、分離膠緩衝(chong) 液和蒸餾水在小燒杯或試管中混合。
3、加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chan) 生氣泡。
4、在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對於(yu) mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端 1.5 cm或距梳齒約0.5cm即可)。
5、靜置,待分離膠和水層之間出現一個(ge) 清晰的界麵後,表麵凝膠已聚合。
灌製濃縮膠
1、小心傾(qing) 倒出覆蓋在分離膠上的水層。
2、將不同體(ti) 積的30%丙烯酰胺/甲叉29:1 、分離膠緩衝(chong) 液和蒸餾水在一個(ge) 小燒杯或試管中混 合。
3、加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chan) 生氣泡。
4、將濃縮膠溶液加至分離膠的上麵,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。
5、將梳子插入凝膠內(nei) ,避免產(chan) 生氣泡。
6、靜置,等待濃縮膠聚合。
7、待凝膠聚合後,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。
進行常規電泳操作。
注意:
TEMED和10%過硫酸銨溶液最後加,在加入之前需混勻前麵所加試劑。10%過硫酸銨在4度有限期為(wei) 一周,TEMED容易揮發,使用後請蓋緊瓶蓋。在常溫下膠30分鍾內(nei) 可以凝固,如溫度過低,可放37度溫箱凝固。灌完分離膠後,輕輕的加1ml ddH2O封上層,凝固後可見到分界線。灌濃縮膠時先傾(qing) 去水層。灌濃縮膠後立刻插入梳子。濃縮膠凝固後,放入電泳液中(讓電泳液漫過加樣孔),輕輕拔出梳子。
附表:
根據目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度,再按照下麵的表格配製SDS-PAGE的分離膠.
分離膠濃度 | 最佳分離範圍 |
6%膠 | 50-150kD |
8%膠 | 30-90kD |
10%膠 | 20-80kD |
12%膠 | 12-60kD |
15%膠 | 10-40kD |
關(guan) 於(yu) SDS-PAGE膠的配製,請參考
試劑 | 分離膠6% | 分離膠8% | 分離膠10% | 分離膠12% | 濃縮膠4% |
配製量 | 10ml | 10ml | 10ml | 10ml | 5ml |
30%丙烯酰胺 | 2.0ml | 2.7ml | 3.3ml | 4.0ml | 0.67ml |
4×分離膠緩衝(chong) 液 | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | 2.5ml | — |
4×濃縮膠緩衝(chong) 液 | --- | — | — | — | 1.25ml |
ddH2O | 5.4ml | 4.7ml | 4.1ml | 3.4ml | 3.025ml |
TEMED | 10ul | 10ul | 10ul | 10ul | 5ul |
10%過硫酸銨 | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul | 50ul |
相關(guan) 產(chan) 品:
30%丙烯酰胺/甲叉 29:1 | 貨號A3291 |
10XTris-gan氨酸-SDS電泳緩衝(chong) 液 | 貨號T7777 |
4 X SDS蛋白上樣緩衝(chong) 液 | 貨號G2526 |
4 X SDS 濃縮膠緩衝(chong) 液 | 貨號S4680 |
4 X SDS 分離膠緩衝(chong) 液 | 貨號S4880 |
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1M TrisT-HCl (pH6.8) | 貨號T1068 |
考馬斯亮藍染色液 | 貨號G1042 |