Ni TED Beads 6FF(鎳填料)，以高流速瓊脂糖為基質，以IDA、NTA、TED為配基，並鼇合金屬離子Ni2+而形成的一種親和層析介質，因整合方式不同，Ni2+離子結合力也存在細微差距，在對不同蛋白的純化過程中表現出不同的選擇性，廣泛用於His標簽蛋白的分離純化，其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。

Ni-TED beads 6FF

貨號：N30250

存儲(chu) 條件：4-30℃

產(chan) 品說明

LABLEAD的Ni親(qin) 和層析介質屬於(yu) 一類金屬鼇合介質，以高流速瓊脂糖為(wei) 基質，以IDA、NTA、TED為(wei) 配基，並鼇合金屬離子Ni²⁺而形成的一種親(qin) 和層析介質，因整合方式不同，Ni²⁺離子結合力也存在細微差距，在對不同蛋白的純化過程中表現出不同的選擇性，廣泛用於(yu) His標簽蛋白的分離純化，其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。在含有EDTA及DTT的情況下直接進行目的蛋白純化，此介質的清洗再生工作簡單，無需脫鎳直接進行NaOH清洗。

技術指標

操作說明

Ni-TED Chromrose 6FF可以在實驗室被填裝到中壓層析柱中，以擴大產(chan) 量。將填料填裝到層析柱中，根據樣本量和填料載量選擇合適的層析柱和柱高。

1. 緩衝(chong) 液準備

所用緩衝(chong) 液需要采用高純水配製，使用前建議用0.45um濾膜過濾。

平衡緩衝(chong) 液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，PH=7.4

漂洗緩衝(chong) 液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，30mM咪唑，PH=7.4

洗脫緩衝(chong) 液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，500mM咪唑，PH=7.4

2. 樣品準備

樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進行裂解、透析/超濾/G25進行緩衝(chong) 液置換。

樣品過濾(平均粒徑<45um，用0.22um過濾；45um<平均粒徑<165um，用0.45um過濾；平均粒徑>165um，用0.8um過濾)。

3. 樣品純化

3.1 用3~5CV的純水衝(chong) 洗出存儲(chu) 緩衝(chong) 液；

3.2 用5~10CV的平衡緩衝(chong) 液平衡層析柱，至流出液電導與(yu) pH不變(與(yu) 平衡液一致)；

3.3 利用泵或者上樣環上樣；

3.4 上樣完畢後用淋洗緩衝(chong) 液衝(chong) 洗10~15CV，至基線穩定

3.5 用洗脫緩衝(chong) 液采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫一般55CV，梯度洗脫可以用一個(ge) 小的梯度，例如20倍柱體(ti) 積來分離不同結合強度的蛋白；

3.6 依次用3CV平衡緩衝(chong) 液，5CV純水，2CV 20%乙醇衝(chong) 洗層析柱後，置於(yu) 2~8°C保存。

4. 在位清洗

當填料在使用過程中發現反壓過高或者填料上出現明顯汙染，需要進行在位清洗操作。

4.1 去除強疏水性結合的蛋白、脂蛋白和脂類

方法一: 使用30%異丙醇清洗5~10CV，接觸時間為(wei) 15~20min可以去除此類汙染物，再用10CV的純水清洗；

方法二: 使用0.3M或0.5M NaOH溶液衝(chong) 洗填料3CV，然後用1015CV的純水清洗。

4.2 去除離子作用結合的蛋白

使用1.5M NaCl溶液清洗10~15min，再用10CV純水清洗，清洗好的柱子用2CV的20%乙醇衝(chong) 洗，置於(yu) 2~8°C保存

圖 1Ni-TED beads 6FF 純化qing黴素酶發酵液電泳圖