LabFD PspGI(EcorII) 快速內切酶，適用於質粒DNA、PCR產物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內切酶具有如下特點：5~15分鍾內即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體係；良好的酶活冗餘度，輕鬆應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有

LabFD PspGI(EcorII) 快速內(nei) 切酶

貨號：F5560S

儲(chu) 存條件：-20℃

同裂酶：EcoRII，MvaI，BstNI, BciT130I, BseBI, AjnI, Psp6I, Bst2UI

注： 同裂酶對於(yu) 不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chan) 品組成

產(chan) 品簡介

LabFD™快速內(nei) 切酶是一係列經過基因工程重組、能夠在5~15分鍾內(nei) 精確完成DNA切割的高保真限製性內(nei) 切酶，適用於(yu) 質粒DNA、PCR產(chan) 物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nei) 切酶具有如下特點：5~15分鍾內(nei) 即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體(ti) 係；良好的酶活冗餘(yu) 度，輕鬆應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體(ti) 驗。

建議反應條件

1×LabFD™緩衝(chong) 液；

37℃溫育；

參照“DNA快速酶切流程"配製反應體(ti) 係。

失活條件

80℃溫育 20 min。

功能活性檢測

最適反應溫度下，在20ul反應體(ti) 係中，1ul LabFD™PspGI能夠在15min內(nei) wanquan消化1ugλDNA(Dcm^-)。

超長時間溫育檢測

最適反應溫度下，將1ul LabFD™  PspGI與1ugλDNA(Dcm^-)共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶汙染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最適反應溫度下，使用1ul LabFD™  PspGI消化底物，回收酶切產物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收後，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。

非特異性內切酶活性檢測

最適反應溫度下，將1ul LabFD™  PspGI與(yu) 1 μg超螺旋質粒 DNA 共同溫育 4 h 後，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少於(yu) 10%的質粒DNA轉變成缺刻或線性狀態。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 在冰上按如下建議的加樣順序配製反應體(ti) 係：

a. 本體(ti) 係適用於(yu) 經過純化的 PCR 產(chan) 物酶切。未純化的 PCR 產(chan) 物具備一定的離子強度，DNA 聚合酶同時具有外切酶活性，會(hui) 影響酶切產(chan) 物，因此如下一步需進行克隆 等操作，建議酶切前對 PCR 產(chan) 物進行純化。

2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然後瞬時離心以收集掛壁液滴；

3) 75℃溫育 15 min（質粒），或 15~30 min（PCR 產(chan) 物），或 30~60 min（基因組 DNA）；

4) 酚氯仿抽提或柱純化（可選）；

5) 如果使用 LabFD™ Color Buffer 進行酶切反應，得到的產(chan) 物可以直接進行上樣電泳。

2.雙酶切或多酶切

1) 每種快速內(nei) 切酶的用量為(wei) 1ul，並根據需要適當擴大反應體(ti) 係；

2) 所有快速內(nei) 切酶的體(ti) 積總和不得超過總反應體(ti) 係的1/10；

3) 如果所用的幾種快速內(nei) 切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應溫度下進行酶切反應。

3.適用於(yu) 質粒的擴大反應體(ti) 係

注：如果總反應體(ti) 係大於(yu) 20ul，應適當增加溫育時間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位點數量

甲基化修飾影響

在不同反應緩衝(chong) 液中的活性

注：活性數據來自LABLEAD限製酶標準反應體(ti) 係下的檢測。