Esp3I 限製性內(nei) 切酶

產(chan) 品貨號：F1503S

儲(chu) 存條件：-20℃

同裂酶：BsmBI, BstGZ53I, Esp16I, Esp23I

注： 同裂酶對於(yu) 不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性

產品組成

產(chan) 品簡介

LabFD™快速內(nei) 切酶是一係列經過基因工程重組、能夠在 5~15 分鍾內(nei) 精確完成 DNA 切割的高保真限製性內(nei) 切酶，適用於(yu) 質粒DNA、PCR 產(chan) 物或基因組DNA 等的快速酶切。LabFD™快速內(nei) 切酶具有如下特點：5~15 分鍾內(nei) 即可完成酶切；共用一種酶切 Buffer，大大簡化酶切反應體(ti) 係；良好的酶活冗餘(yu) 度， 輕鬆應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體(ti) 驗。

建議反應條件

1×LabFD™緩衝(chong) 液；37℃溫育；參照“DNA 快速酶切流程"配製反應體(ti) 係。

失活條件

80℃溫育 20 min。

功能活性檢測

最適反應溫度下，在 20ul 反應體(ti) 係中，1ulLabFD™ Esp3I 能夠在 15min 內(nei) 消化 1ug λDNA。

超長時間溫育檢測

最適反應溫度下，將 1ul LabFD™ Esp3I 與(yu) 1ug λDNA 共同溫育 3h，未檢測到其他核酸酶汙染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最適反應溫度下，使用 1ul LabFD™ Esp3I 消化底物，回收酶切產(chan) 物。在 22℃下使用適量 Fast T4 DNA Ligase 可以將酶切產(chan) 物重新連接。將連接產(chan) 物再次回收後，使用相同的內(nei) 切酶可以重新切開連接產(chan) 物。

非特異性內切酶活性檢測

最適反應溫度下，將 1ul LabFD™ Esp3I 與(yu) 1ug 超螺旋質粒 DNA 共同溫育 4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒 DNA 仍然處於(yu) 超螺旋狀態。

使用方法

1. DNA 快速酶切流程

  （1）在冰上按如下建議的加樣順序配製反應體(ti) 係：

注：本體(ti) 係適用於(yu) 經過純化的 PCR 產(chan) 物酶切，未純化的 PCR 具備一定的離子強度，10xLabFDTMbuffer 加入量可適當減少至2ul。但由於(yu) DNA 聚合酶同時具有外切酶活性，會(hui) 影響酶切產(chan) 物，因此如下一步需進行克隆等操作，建議酶切前對PCR 產(chan) 物進行純化。

  （2） 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然後瞬時離心以收集掛壁液滴；

（3）37℃溫育 15min（質粒），或 15~30min（PCR 產(chan) 物），或 30~60min（基因組 DNA）；

（4）80℃溫育 20min 即可使酶失活，停止反應（可選）。

2. 雙酶切或多酶切

  （1） 每種快速內(nei) 切酶的用量為(wei) 1ul，並根據需要適當擴大反應體(ti) 係；

  （2） 所有快速內(nei) 切酶的體(ti) 積總和不得超過總反應體(ti) 係的 1/10；

（3） 如果所用的幾種快速內(nei) 切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應溫度下進行酶切反應。

3. 適用於質粒的擴大反應體係

注：如果總反應體(ti) 係大於(yu) 20ul，應適當增加溫育時間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同 DNA 中的酶切位點數量

甲基化修飾影響

在不同反應緩衝(chong) 液中的活性

注：活性數據來自LABLEAD 限製酶標準反應體(ti) 係下的檢測。