快速內切酶KpnI快速內切酶經過基因工程重組、能夠在5~15分鍾內精確完成DNA切割的高保真限製性內切酶，適用於質粒DNA、PCR產物或基因組DNA等的快速酶切。快速內切酶具有如下特點：5~15分鍾內即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體係；良好的酶活冗餘度，輕鬆應對底物過量或困難模板酶切。

KpnI 快速內(nei) 切酶

產(chan) 品貨號：F5544S

儲(chu) 存條件：-20℃                                                 

產(chan) 品組成

產(chan) 品簡介

LabFD™快速內(nei) 切酶是一係列經過基因工程重組、能夠在5~15 分鍾內(nei) 精確完成 DNA 切割的高保真限製性內(nei) 切酶，適用於(yu) 質粒 DNA、PCR 產(chan) 物或基因組 DNA 等的快速酶切。LabFD™ 快速內(nei) 切酶具有如下特點：5~15 分鍾內(nei) 即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體(ti) 係；良好的酶活冗餘(yu) 度，輕鬆應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer 中具有baifenzhibai活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體(ti) 驗。

建議的反應條件：

1× LabFD™緩衝(chong) 液；

37℃溫育；

參照“DNA快速酶切流程"配製反應體(ti) 係。

失活條件

80℃溫育20min。

質量控製

功能活性檢測

最shi反應溫度下，在20ul反應體(ti) 係中，1ul LabFD™ KpnI能夠在15min 內(nei) *消化1ug λDNA(HindIII digest)。

超長時間溫育檢測

最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ KpnI 與(yu)  1ugλDNA(HindIII digest)共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶汙染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最shi反應溫度下，使用 1ul LabFD™ KpnI消化底物，回收酶切產(chan) 物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chan) 物重新連接。將連接產(chan) 物再次回收後，使用相同的內(nei) 切酶可以重新切開連接產(chan) 物。

非特異性內(nei) 切酶活性檢測

最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ KpnI與(yu) 1ug超螺旋質粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒DNA仍然處於(yu) 超螺旋狀態。

藍白斑檢測

將含有單一lacZα基因的載體(ti) 以1ul LabFD™ KpnI消化，重新連接後轉化入大腸杆菌感受態細胞，塗布在含有對應抗生素、IPTG 和X-gal的LB培養(yang) 基平板上。連接正確的產(chan) 物會(hui) 生長出藍色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產(chan) 物將得到白色菌落。對於(yu) LabFD™係列限製酶而言，白色菌落比例應小於(yu) 1%。