SpeI快速內(nei) 切酶

產(chan) 品貨號：F5574s

儲(chu) 存條件：-20℃

同裂酶：AhlI，BcuI

注：同裂酶對於(yu) 不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

產(chan) 品組成

產(chan) 品簡介

LabFD™快速內(nei) 切酶是一係列經過基因工程重組、能夠在5~15分鍾內(nei) 精確完成DNA切割的高保真限製性內(nei) 切酶，適用於(yu) 質粒DNA、PCR產(chan) 物或基因組DNA等的快速酶切。LabFD™快速內(nei) 切酶具有如下特點：5~15分鍾內(nei) 即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體(ti) 係；良好的酶活冗餘(yu) 度，輕鬆應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer中具有百分之bai活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體(ti) 驗。

建議反應條件

1×LabFD™緩衝(chong) 液；

37℃溫育；

參照“DNA快速酶切流程"配製反應體(ti) 係。

失活條件

80℃溫育20min。

功能活性檢測

最shi反應溫度下，在20ul反應體(ti) 係中，1ul LabFD™ SpeI能夠在15min內(nei) *消化1ugpUC19-SpeI DNA。

超長時間溫育檢測

最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ SpeI與1ug pUC19-SpeI DNA共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶汙染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測

最shi反應溫度下，使用1ul LabFD™ SpeI消化底物，回收酶切產物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收後，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。

非特異性內切酶活性檢測

最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ SpeI與(yu) 1ug超螺旋質粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒DNA仍然處於(yu) 超螺旋狀態。

藍白斑檢測

將含有單一lacZα基因的載體(ti) 以1ul LabFD™ SpeI消化，重新連接後轉化入大腸杆菌感受態細胞，塗布在含有對應抗生素、IPTG和X-gal的LB培養(yang) 基平板上。連接正確的產(chan) 物會(hui) 生長出藍色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產(chan) 物將得到白色菌落。對於(yu) LabFD™ 係列限製酶而言，白色菌落比例應小於(yu) 1%。

使用方法

1、DNA快速酶切流程

1）在冰上按如下建議的加樣順序配製反應體(ti) 係：

注：本體(ti) 係適用於(yu) 經過純化的PCR產(chan) 物酶切，未純化的PCR具備一定的離子強度，10xLabFD^TMbuffer加入量可適當減少至2ul。但由於(yu) DNA聚合酶同時具有外切酶活性，會(hui) 影響酶切產(chan) 物，因此如下一步需進行克隆等操作，建議酶切前對PCR產(chan) 物進行純化。

1）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然後瞬時離心以收集掛壁液滴；

2）37℃溫育15min（質粒），或15~30min（PCR產(chan) 物），或30~60min（基因組DNA）；

3）80℃溫育20min即可使酶失活，停止反應。

2、雙酶切或多酶切

1) 每種快速內(nei) 切酶的用量為(wei) 1ul，並根據需要適當擴大反應體(ti) 係；

2) 所有快速內(nei) 切酶的體(ti) 積總和不得超過總反應體(ti) 係的1/10；

3) 如果所用的幾種快速內(nei) 切酶的最shi反應溫度不同，應先以最shi溫度低的酶開始酶切，再添加最shi溫度較高的酶，在其最shi反應溫度下進行酶切反應。

3.適用於(yu) 質粒的擴大反應體(ti) 係

注：如果總反應體(ti) 係大於(yu) 20ul，應適當增加溫育時間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位點數量

甲基化修飾影響

在不同反應緩衝(chong) 液中的活性

注：活性數據來自LABLEAD限製酶標準反應體(ti) 係下的檢測。