羅丹明標記鬼筆環肽(橙紅）是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。它是特異性結合於 F-肌動蛋白的雙環肽。因此用熒光染料標記的鬼筆環肽可以非常方便的研究 F-肌動蛋白的分布。鬼筆環肽內部，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內環結構。在pH 升高時，該硫醚被裂解，鬼筆環肽失去對肌動蛋白的親和力。

羅丹明標記鬼筆環肽(橙紅）

產(chan) 品貨號：G0063

儲(chu) 存條件：-20℃幹燥、避光保存。配成溶液後建議分裝。

產(chan) 品參數

Ex/Em：546/575 nm

產(chan) 品簡介：

鬼筆環肽是從(cong) 致命的傘(san) 形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。它是特異性結合於(yu)  F-肌動蛋白的雙環肽。因此用熒光染料標記的鬼筆環肽可以非常方便的研究 F-肌動蛋白的分布。鬼筆環肽內(nei) 部，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nei) 環結構。在pH 升高時，該硫醚被裂解，鬼筆環肽失去對肌動蛋白的親(qin) 和力。

在各種植物細胞或動物細胞中，標記的鬼筆環肽對大、小細絲(si) 具有相似的親(qin) 和力，平均每個(ge) 肌動蛋白亞(ya) 基結合一個(ge) 鬼筆環肽分子。不同於(yu) 抗體(ti) ，鬼筆環肽與(yu) 肌動蛋白的結合親(qin) 和力在不同物種間沒有顯著變化。非特異性染色可以忽略不計，染色和未染色區域之間的對比度非常大。鬼筆環肽將單體(ti) /聚合物的平衡轉向聚合狀態，將聚合臨(lin) 界濃度降低至 30 倍。Phallotoxins 可通過抑製細胞鬆弛素的解聚，碘化鉀和升高的溫度，穩定 F-肌動蛋白。因為(wei) 鬼筆環肽綴合物很小， 大約直徑 12-15 埃，分子量<2000 道爾頓，多種肌動蛋白結合蛋白，包括肌球蛋白，原肌球蛋白和後肌鈣蛋白依然可以和鬼筆環肽標記的肌動蛋白結合。更重要的是，鬼筆環肽標記的肌動蛋白絲(si) 保持功能，標記甘油肌纖維仍然收縮，標記的肌動蛋白絲(si) 仍然可以繼續移動。而且熒光標記的鬼筆環肽也可用於(yu) 對細胞中 F-肌動蛋白進行定量研究。

使用方法

1、儲(chu) 液製備

Rhodamine-Phalloidin：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍幹的粉末，製備成 200T/mL 的儲(chu) 液（300T 規格染料加入 1.5 mL 的液體(ti) ，50T 規格染料加入 0.25 mL 的液體(ti) 即可）。

Rhodamine-Phalloidin 的一個(ge) 單位（T）的定義(yi) 是染色一個(ge) 加載細胞的載玻片所用染料的量。對於(yu) 羅丹明標記的鬼筆環肽，使用時的推薦稀釋比例為(wei) 1: 40-1: 200，一個(ge) 單位相當於(yu) 200 μL 總染色體(ti) 積中加入 1-5 μL 200T/mL 儲(chu) 備溶液。注：稀釋比例可以根據實際染色效果進行適當調整。

2、固定細胞染色

以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或 8 孔室玻片上的貼壁細胞的染色步驟。鬼筆環肽也可用於(yu) 染色固定的冷凍或石蠟組織切片。

（1）用PBS 清洗細胞 3 次。

（2）用含有 3.75%甲醛的 PBS 溶液固定細胞，冰上固定15 min。

注：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最hao避免含有任何甲醇的固定劑。優(you) 選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

（3）用PBS 清洗細胞 3 次。

（4）用含 0.5% Triton X-100 的PBS 溶液在室溫下透化細胞10min。

（5）用PBS 清洗細胞 3 次。

（6）用 200 μL PBS 稀釋 1-5 μL 熒光標記的鬼筆環肽儲(chu) 液， 加入一個(ge) 蓋玻片或孔中，室溫孵育 20 min，進行染色。

注：染色體(ti) 積可根據樣本情況進行調節。孵育過程中為(wei) 避免染液揮發，可將蓋玻片放於(yu) 密封容器內(nei) 。

（7）用 PBS 清洗細胞 2-3 次。

（8）熒光顯微鏡觀察。標記的鬼筆環肽具有很好的光穩定，樣品可以在 PBS 中成像，但為(wei) 了效guo最jia，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察。

3、活細胞染色

熒光標記的鬼筆環肽不具有細胞透性，因此沒有被廣泛用於(yu) 活細胞標記。然而，有報道稱活細胞可能通過胞飲或未知機製進行標記。一般來說，染色活細胞時需要更多的染料。或者，熒光標記的鬼筆環肽也可被注入到細胞中用於(yu) 監測肌動蛋白分布和細胞運動。

注意事項

本產(chan) 品為(wei) 凍幹粉形式，微量不易觀察，使用前請瞬時離心，加適當溶劑溶解後使用，溶解後的溶液近乎透明色。