噻唑蘭 MTT也稱作溴化噻唑藍四氮唑，是一種黃色染料，已經普遍替代傳統的台盼藍染色法或者放射性同位素插入法，用來檢測細胞的活力，細胞增殖以及細胞毒性分析。

噻唑蘭(lan) MTT

產(chan) 品貨號：0793-1

儲(chu) 存條件：冰袋運輸。4℃避光幹燥保存。

產(chan) 品描述

噻唑蘭(lan) （Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT），也稱作溴化噻唑藍四氮唑，是一種黃色染料，已經普遍替代傳(chuan) 統的台盼藍染色法或者放射性同位素插入法，用來檢測細胞的活力，細胞增殖以及細胞毒性分析。檢測原理在於(yu) ：MTT是一種可接受氫離子的化合物染料，帶正電荷，具有細胞膜滲透性。活細胞線粒體(ti) 中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源進入的MTT還原成為(wei) 水不溶性的深藍色MTT-甲臢結晶，而死細胞不具有此功能。甲臢結晶是不能穿透細胞膜，因此沉積在處於(yu) 增殖且未受損傷(shang) 的細胞內(nei) 。甲臢結晶可用DMSO或者酸化的異丙醇溶解出來，酶標儀(yi) 下測定570nm的吸光度反映甲臢的生成量。而甲臢的生成量與(yu) 活細胞數目成正比，用以評估細胞存活狀況。

MTT也可用作免疫組化/細胞化學染色試劑，也可用來檢測NAD。MTT被快速還原成甲臢後，能夠螯合鎳，銅和鈷。鈷螯合物可參與(yu) 機體(ti) 氧化係統。

產(chan) 品性質

使用方法（以96孔板為(wei) 例）

細胞生長的培養(yang) 條件會(hui) 影響檢測結果，因此進行MTT檢測時需考慮這些條件，包括：培養(yang) 時間，傳(chuan) 代次數以及生長培養(yang) 基的成分等。一般情況，48-72h培養(yang) 時間下，最初鋪板的細胞密度可控製在5000-10,000/孔。

【注】

最終檢測的培養(yang) 液內(nei) 含有酚紅會(hui) 嚴(yan) 重影響檢測結果。推薦MTT檢測時細胞培養(yang) 在無酚紅環境下。也可以在進行MTT孵育的時候改用無酚紅培養(yang) 液。

A．工作液配製

1）MTT溶液

生化研究中，常配製成5mg/mL的儲(chu) 備液。MTT最hao現配現用，可以稱取MTT 0.5 g，溶於(yu) 100 mL的磷酸緩衝(chong) 液（PBS）或無酚紅的培養(yang) 基中，用0.22 μm濾膜過濾以除去溶液裏的細菌，4℃ 避光短時間保存。建議小劑量分裝放到-20℃長期保存，避免反複凍融。

2）SDS-HCl溶液（MTT終止液）

取10 mL 0.01 M HCl加入1 g SDS，顛倒混勻或者超聲使其*溶解，此時即為(wei) 終止液。建議現配現用。

B．MTT細胞增殖檢測

1）接種細胞：用含10%胎牛血清（FBS）的培養(yang) 液配製成單個(ge) 細胞懸液，調整細胞密度，以每孔5000-10, 000個(ge) 細胞接種到96孔板，每孔體(ti) 積100 µL，培養(yang) 板的邊緣孔用無菌PBS填充。設置空白對照孔（不含有細胞）。

2）37℃，5% CO2，培養(yang) 24-72 h。

3）可選：對於(yu) 貼壁細胞，去除舊的培養(yang) 液，更換100 µL/孔新鮮的培養(yang) 液（不含酚紅）；對於(yu) 懸浮細胞，離心96孔板，去除盡可能多的上清液。然後加入 100 µL/孔新鮮的培養(yang) 液（不含酚紅）重懸細胞；

4）每孔加入10 µL MTT溶液（5 mg/mL），加樣時盡量勤換槍頭，控製加量誤差。

5）水平搖床上低速混勻1 min後，放入37℃培養(yang) 箱孵育4h。【注】：對於(yu) 高密度的細胞（>100,000 cells/孔）可縮短孵育時間至2 h。

6）對於(yu) 貼壁細胞，直接吸掉舊的培養(yang) 液，避免槍尖刮破單細胞層。對於(yu) 懸浮細胞，離心收集細胞，去除培養(yang) 液。

7）加入100 µL/孔SDS-HCl溶液，用槍充分混勻後放入37℃培養(yang) 箱孵育4 h。【注】：更長的孵育時間會(hui) 降低檢測靈敏度。

8）孵育結束，放置在酶標儀(yi) 上搖勻後，選擇570 nm，測定吸光度。記錄結果，比色以空白調零。

【注】

對於(yu) 細胞毒性檢測，以未經藥物處理細胞的OD值為(wei) 百分之bai，然後計算藥物處理細胞所占的比率（x），公式如下：OD（未處理細胞）/OD（藥物處理細胞）=百分之bai/x。然後建立直方圖。

注意事項

1）溶解甲臢的有機溶劑具有毒性，使用時注意防護。

2）MTT有致癌性，應小心操作；MTT溶液需要無菌，因其對菌很敏感。MTT溶液不可4℃保存超過1周，因其可能發生降解，導致檢測結果錯誤。

3）MTT法隻能用來檢測細胞相對數和相對活力，但不能測定細胞絕dui數。在用酶標儀(yi) 檢測結果的時候，為(wei) 了保證實驗結果的線性，MTT吸光度最hao在0-0.7範圍內(nei) 。

4）為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

5）本產(chan) 品僅(jin) 作科研用途！