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細胞與(yu) 免疫學試劑
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懸浮細胞小核酸ray.雷竞技
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | T1024 |
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規格 | 1ML | 供貨周期 | 現貨 |
LabFect SP懸浮細胞小核酸ray.雷竞技
貨號:T1024
存儲(chu) 條件:藍冰運輸,4°C 保存,超一個(ge) 月不用於(yu) -20°C儲(chu) 存,-20℃保存條件下,有效期為(wei) 1 年。避免反複凍融。
產(chan) 品特點:
卓yue的懸浮細胞轉染性能:細胞轉染陽性率一般在75%以上,基因敲除效率在80%以上;
極低的細胞毒性:轉染細胞死亡率不到10%,大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響;
轉染細胞範圍廣,絕大多數懸浮細胞都能獲得比較理想的轉染結果。
產(chan) 品介紹
LabFect 可用來轉染 siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor 等 200bp 以內(nei) 的小分子 RNA,可轉染絕大多數懸浮細胞。目前, 無論國外還是國內(nei) ,懸浮細胞的核酸轉染都是個(ge) 熱點難題,市場還缺乏真正有效的商品化的懸浮細胞小核酸ray.雷竞技。LabFect 能夠高效轉染絕大多數懸浮細胞,獲得比較理想的基因敲除效果。對於(yu) 大多數懸浮細胞,LabFect 的細胞轉染陽性率都在 75%以上,而轉染細胞死亡率不到10%。LabFect 的使用也極其簡便,先將 sRNA 與(yu) LabFect 室溫混合,再將siRNA-LabFect 混合物直接加入含培養(yang) 基的細胞,血清對轉染效果沒有影響,不必刻意添加或更換培養(yang) 液。
應用:
siRNA 轉染
antisense RNA 轉染
200bp 內(nei) 的小分子 DNA 轉染
質量控製
本產(chan) 品經嚴(yan) 格的質量檢驗證明,無生物汙染。
操作步驟:本說明書(shu) 適用於(yu) 24孔培養(yang) 板的轉染實驗,其他規格的培養(yang) 板的用量參照下麵表格,表格給出的是每孔的用量與(yu) 體(ti) 積。
1. 細胞接種:轉染前一天接種細胞,每孔500 μl培養(yang) 基,使細胞在轉染時密度在30-50%,盡量不要使用抗生素。
2. siRNA-Labfect SP混合物準備:
2.1 6pmol siRNA 用 50μl 無血清培養(yang) 基稀釋。
2.2 2μl Labfect SP用 50μl 無血清培養(yang) 基稀釋。輕輕混勻,室溫孵育 5min。
注意:確保在 25 min 內(nei) 執行第三步操作,不要過於(yu) 延遲。
2.3 孵育 5min 後,將 siRNA 稀釋液與(yu) Labfect SP稀釋液混合(總體(ti) 積 100μl)。輕輕混勻,室溫孵育 20 min。
3. 將混合物加到培養(yang) 的細胞內(nei) (*培養(yang) 基培養(yang) ):
3.1 將100μl混合物加入培養(yang) 孔內(nei) ,培養(yang) 孔內(nei) 含有 0.5ml 培養(yang) 的細胞。輕輕晃動培養(yang) 板 5min,混勻。
3.2 37°C培養(yang) 48-72h,檢測基因抑製效果。如果需要,細胞培養(yang) 4-6h時可以更換培養(yang) 基,但不是必須。孵育時間的長短,取決(jue) 於(yu) 細胞類型、 所幹擾基因本身及分析方法。可設置不同的孵育時間進行實驗以確定最jia孵育時間。
注意事項:
1. 懸浮細胞轉染難度較大,首ci轉染時,請務必對轉染條件進行優(you) 化。例如:24 孔培養(yang) 板,可進行如下交叉實驗:
LabFect | siRNA(pmol) |
2ul | 20、30、40、50 |
3ul | 20、30、40、50 |
4ul | 20、30、40、50 |
2. 轉染時,細胞生長狀態應保持良好,密度不能過大,培養(yang) 液盡量不要使用抗生素,否則會(hui) 導致細胞死亡增加。
3. 為(wei) 了提高轉染效率,轉染後培養(yang) 板可放於(yu) 微型振蕩器上培養(yang) 或每隔 1 小時人工晃動 1 次。
LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels
Surface area/well | Vol. of growth medium | Vol. of dilution medium | siRNA Amount | LabFect | |
(cm2) | (µl) | (µl) | (pmol) | (µl) | |
96-well | 0.3 | 100 | 2 x 10 | 6 | 0.6 |
48-well | 0.8 | 250 | 2 x 25 | 15 | 1.5 |
24-well | 2 | 500 | 2 x 50 | 30 | 3 |
12-well | 4 | 1000 | 2 x 100 | 60 | 6 |
6-well | 10 | 2500 | 2 x 250 | 150 | 15 |