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細胞與(yu) 免疫學試劑
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LabFect 質粒DNAray.雷竞技
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | T2113 |
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規格 | 1ML | 供貨周期 | 現貨 |
LabFect 質粒DNAray.雷竞技
貨號:T2113
存儲(chu) 條件:: 4-8℃保存,有效期一年。每次使用之前請先將本品上下顛倒混勻。
產(chan) 品說明:
LabFect Plasmid質粒DNAray.雷竞技是專(zhuan) 門用於(yu) 質粒DNA細胞轉染的ray.雷竞技。LabFect Plasmid 具有非常卓yue的轉染性能,可高效轉染多種貼壁細胞、原代細胞和懸浮細胞,轉染效率在貼壁細胞中高達90%以上(EGFP質粒)。LabFect Plasmid 不僅(jin) 可轉染較大分子的質粒DNA,還可轉染RNA和小分子DNA。與(yu) 目前市場上常見的脂質體(ti) ray.雷竞技不同,LabFect Plasmid 采用生物可降解材料配製,對細胞的毒性很低,轉染後細胞死亡率不到10%。LabFect Plasmid 使用也非常方便,先將ray.雷竞技與(yu) 質粒DNA混合,再將ray.雷竞技-DNA複合物直接加入培養(yang) 細胞中,血清不影響其轉染效果,不必刻意添加或更換培養(yang) 液,操作十分簡便。
產(chan) 品特點:
卓yue的細胞轉染性能:可高效轉染多種原代細胞,轉染效率高達70%以上;
極低的細胞毒性:使用可降解生物材料,細胞毒性低,轉染細胞死 亡率不到10%,大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響,實驗結果更為(wei) 客觀;
操作簡便,可用於(yu) 含血清培養(yang) 基培養(yang) 細胞的轉染,轉染前後不需要更換培養(yang) 液。
注意事項:
因細胞密度隨細胞係不同會(hui) 有很大差別,且細胞密度直接決(jue) 定轉染效率,因此請在轉染過程中盡量保持同樣的接種比例,以提高轉染重複性。多數哺乳動物細胞應在37℃、5%CO2條件下培養(yang) 。其他的一些細胞係,例如昆蟲細胞,需要在不同的溫度和CO2濃度下進行培養(yang) 。請根據具體(ti) 細胞係選擇最shi培養(yang) 條件。應避免包裝反應體(ti) 係中存在血清,因血清會(hui) 幹擾LabFect與(yu) DNA形成複合物 。如果轉染DNA量較大或者當複合物包裝時反應體(ti) 係中出現沉澱時, 請將包裝反應體(ti) 係調整至1ml進行。
適用細胞係: 293T,A549,B16F10,HEK 293,HeLa,Hepa 1-6,Hepa 1cLc7,HepG2,BHK-21,BNL.CL2,BRL-3A,C2C12,C6, CHO-K1,Clone 9,COS-1,COS-7,Daoy,DBTRG-05MG,DI- TNC1,DU 145,HLF-a,Huh-7,K562,KB,KLN 205,Lυ2 (LLC1),NCaP-FGC,MCF-7,MEL,Neuro-2a,NIH3T3,OVCAR3,PC3,PC-12,等。
試劑盒內(nei) 容物:LabFect 質粒DNAray.雷竞技
方法步驟(以24孔板轉染為(wei) 例):
1. 細胞接種:
a. 轉染前24小時左右對細胞進行鋪板(不含抗生素),培養(yang) 過夜;
b. 確保轉染時細胞密度達90%-95%。
2. LabFect/DNA複合物包裝(該步完成後應立即轉染):
a. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yang) 基,並添加適量的轉染 試劑(參見附表) 。用移液器輕輕混勻後在室溫靜置5分鍾。
b. 在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yang) 基,並添加適量的DNA,用移液器輕輕混勻後在室溫靜置5分鍾。 (參見附表。首ci使用建議在附表提供的DNA和ray.雷竞技參考量的基礎上進行優(you) 化實驗,以摸索兩(liang) 者之間的最you搭配比例)。
c. 將LabFect-培養(yang) 基混合物滴加至DNA-培養(yang) 基混合物中,用移液器 輕輕混勻後在室溫靜置15~20分鍾後,立即轉染。注意: LabFect-培養(yang) 基混合物和DNA-培養(yang) 基混合物的混合次序非常重要,切勿顛倒。
3. 轉染:
注意:LabFect在*培養(yang) 基中(基礎培養(yang) 基中添加血清)具有最gao的轉染效率,因此轉染前後不需要換成無血清培養(yang) 基。 a. 如特殊情況,可在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養(yang) 基,以防轉染後孵育階段細胞密度太大、營養(yang) 不足導致的細胞死亡。
b. 將步驟2製備的複合物滴加至培養(yang) 基中。輕輕晃動培養(yang) 皿以使複合物均勻分布。
c. 培養(yang) 4h後,加入1ul溶液A,輕搖混勻(此步可選,溶液A另購)。
d. 過夜培養(yang) 24~48小時。
e. 注意:如果轉染後需要更換新鮮培養(yang) 基,請於(yu) 加入LabFect/DNA複合物12~24小時後進行。培養(yang) 基更換後,孵育24~48小時後再進行後續實驗。
f. 收獲細胞,進行後續實驗。
質量控製
本產(chan) 品經嚴(yan) 格的質量檢驗證明,無生物汙染
注意:
本產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研實驗
附表:不同培養(yang) 體(ti) 係推薦初始轉染條件
培養(yang) 皿 | 96 孔板 | 48 孔板 | 24 孔板 | 12 孔板 | 6 孔板 | 10cm 皿 | |
表麵積 (cm2) | 0.35 | 1.0 | 1.9 | 3.8 | 9.6 | 59 | |
培養(yang) 基、試劑、DNA 量 | 無血清培養(yang) 基(μl) | 20 | 50 | 100 | 200 | 400 | 2000 |
LabFect (μl) | 0.25 | 0.5 | 1.4 | 2.5 | 5 | 50 | |
1μg/μl plasmid (μl) | 0.15 | 0.3 | 0.8 | 1.5 | 3 | 60 | |
*培養(yang) 基(ml) | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 |