CelGreen核酸染料無毒性，靈敏度高，穩定性高，信噪比高，操作簡單

CelGreen核酸染料

貨號：CG001

儲(chu) 存條件：  4℃避光可保存12個(ge) 月。

CelGreen核酸染料特點

 ●無毒性：CelGreen的油性和大分子量特點使其不能穿透細胞膜進入細胞內(nei) ，艾姆斯氏試驗結果也表明，該染料的誘變性遠遠小於(yu) EB。

●靈敏度高：適用於(yu) 各種大小片段的電泳染色，對核酸遷移的影響小於(yu) SYBR Green I。

 ●穩定性高：適用於(yu) 使用微波或其它加熱方法製備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩衝(chong) 液中極其穩定，耐光性強。

●信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低。

 ●操作簡單：與(yu) EB一樣，在預製膠和電泳過程中染料不降解；而電泳後染色過程也隻需30分鍾且無需脫色或衝(chong) 洗 ，即可直接用紫外凝膠透射儀(yi) 觀察。

 ●適用範圍廣：可選擇電泳前染色（膠染法）或電泳後染色（泡染法）；適用於(yu) 瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；可用於(yu)  dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

●在480nm可見光附近可得到激發。

CelGreen核酸染料使用方法簡介

1．膠染法（用法同EB）（推薦方法）

（1）製膠時加入CelGreen 核酸染料（例如：每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL CelGreen 10,000× 儲(chu) 液，以此比例類推）。

（2）按照常規方法進行電泳。

注意事項：

u此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。

  u由於(yu) CelGreen具有良好的熱穩定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將CelGreen儲(chu) 液加到瓊脂糖粉末 和電泳緩衝(chong) 液中，然後用微波爐或其他常用方式加熱以製備瓊脂糖凝膠。CelGreen兼容所有常用的電泳緩衝(chong) 溶液。

  u如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認問題是否與(yu) 染料有關(guan) 。如果染色後問題依舊存在，則說明問題與(yu) 染料無關(guan) ，請嚐試：降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；延長凝膠時間以保證邊緣清晰；改進上樣技巧或選擇泡染法染色。

u此方法不適合預製聚丙烯酰胺凝膠，對於(yu) 聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

2．泡染法

（1）按照常規方法進行電泳。

（2）用H2O將CelGreen 10,000× 儲(chu) 液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，製成3× 染色液（例如將15μL CelGreen10,000× 儲(chu) 液和5mL 1M NaCl加到45mL H₂O中）。

（3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，染色時間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對 於(yu) 含3.5～10%丙烯酰胺的凝膠，染色時間通常介於(yu) 30min到1h，並隨丙烯酰胺含量增加而延長。

（4）用 480nm 可見光係統觀察結果。

注意事項：

u用泡染法染色時，染料用量較多。單次使用的染色液可重複使用3次左右。

u3 × CelGreen染色液可以大量製備，在室溫下避光保存直至用完。

3．核酸電泳的PAGE步驟：

（1）將TBE製備的凝膠放入電泳槽中，用夾子夾住邊緣。

（2）用配置凝膠溶液同一批次的5×TBE灌滿緩衝(chong) 液槽。用注射器排除凝膠底部的氣泡。

（3）用注射器吸取1×TBE衝(chong) 洗加樣孔。將DNA樣品和適量的6×凝膠上樣緩衝(chong) 液混合，用微量移液管加入加樣孔。

（4）將電極與(yu) 電源相連（正極接下槽），打開電源一般90V；1～8V/cm。進行電泳9h。

（5）電泳至標準參照染料遷移至所需位置（一般是電泳到二甲苯*遷出，溴酚藍距底邊2～3cm停止）。關(guan) 閉電源，拔掉插頭，棄去電泳槽中的電泳液。

（6）將凝膠取下來放入，染色皿中，加3XCelGreen的1X緩衝(chong) 液中的振蕩染色30-60分，放置在紫外檢測即可。

注意事項：

PAGE膠與(yu) 瓊酯糖凝膠不同，不能用預染或點染的方法；隻能用泡染的方法顯色，由於(yu) 聚丙烯酰胺比較致密，染料不容易深入，顯色效果沒有瓊酯糖凝膠好。

特別提醒：

u如果您使用的是紫外成像儀(yi) ，請選擇CelRed；如果您使用激光成像儀(yi) 或希望在可見光下觀測，請選擇CelGreen核酸染料。

u在極少數情況下，質粒經某些酶切後的DNA樣品會(hui) 出現拖尾和分辨率降低，此時建議同時嚐試兩(liang) 種染色方法以決(jue) 定哪種方法更加合適。