TriZol 總RNA提取試劑是廣譜型總RNA 提取試劑。實驗操作快速方便，顏色鮮明，便於分層。本試劑適用範圍廣泛，可以從動物組織、植物材料、各種微生物及培養細胞等樣品中提取總RNA。

TriZol 總RNA提取試劑

產(chan) 品貨號：R1000

儲(chu) 存條件：TriZol總RNA提取試劑在室溫下能穩定保存12個(ge) 月。我們(men) 建議保存在2~8°C的環境下。

重要提示：

本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體(ti) 內(nei) 、接觸皮膚、吞食等會(hui) 導致中毒、灼傷(shang) 以及其他身體(ti) 傷(shang) 害。使用本製品時應穿戴防護物品，如手套、眼罩、麵罩等。如果不小心接觸，應立即用大量的水衝(chong) 洗並前往醫院治療。

產(chan) 品介紹：

TriZol 總RNA提取試劑是廣譜型總RNA 提取試劑。實驗操作快速方便，顏色鮮明，便於(yu) 分層。本試劑適用範圍廣泛，可以從(cong) 動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yang) 細胞等樣品中提取總RNA。該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在TriZol總RNA提取試劑中被充分裂解的同時能夠盡可能地保證RNA 的完整性。在加入氯仿離心後，溶液會(hui) 分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機相，RNA分布在上清層中。收集上清層後，經異丙醇沉澱便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA汙染，可用於(yu) 各種分子生物學常規實驗，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、體(ti) 外翻譯等。

TriZol總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從(cong) 大鼠肝髒抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳並用溴化乙啶染色，可見許多介於(yu) 7kb和15 kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩(liang) 條優(you) 勢核糖體(ti) ~5 kb(28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介於(yu) 0.1和0.3 kb之間(tRNA, 5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置，不同濃度的凝膠位置變化較大。

注意事項：

1.樣品用TriZol總RNA提取試劑勻漿後，如果不即刻加入氯仿之前，，置於(yu) -70°C下可放置一個(ge) 月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉澱，2-8°C可以保存一周，-20°C條件下可以保存1 年。RNA 半衰期比較短，容易降解，建議提取後盡快進行後續實驗，如反轉錄成cDNA，Northern Blot 等。

2.若下遊實驗對DNA非常敏感，建議用RNase free DNase I對RNA進行處理。

3.自備試劑：氯仿、異丙醇（新開封或提取RNA專(zhuan) 用）、75%乙醇(用DEPC 處理過的水配製)、RNase free water或者DEPC 處理過的水。

4. 本公司生產(chan) TriZol總RNA 提取試劑Reagent 質量優(you) 異，可以替代Invitrogen的Trizol Reagent。提取質量和下遊實驗*一樣。

RNA 抽提操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：

用TriZol總RNA提取試劑抽提RNA 時要戴手套和護眼罩。避免接觸皮膚和衣服。在化學通風櫥完成操作。避免呼吸道吸入。如無特殊說明，所有的操作應該在在15~30°C的室溫條件下。

1.勻漿

a. 植物組織：

取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或將植物組織處理碎後直接在TriZol 總RNA提取試劑中迅速研磨，每50-100mg組織加入1ml TriZol總RNA提取試劑，混勻。注意：樣品體(ti) 積一般不要超過TriZol總RNA提取試劑體(ti) 積的10%。

b. 動物組織：

取新鮮或-70℃凍存動物組織盡量剪碎，每30-100mg組織加入1ml TriZol總RNA提取試劑，勻漿儀(yi) 進行勻漿處理。或在液氮中研磨後加入TriZol總RNA提取試劑1ml混勻。注意：樣品體(ti) 積一般不要超過TriZol總RNA提取試劑體(ti) 積的10%。

c. 單層培養(yang) 細胞：

盡量去除幹淨殘留培養(yang) 液後直接往直徑3.5 cm的培養(yang) 板中加入1ml的TriZol總RNA提取試劑覆蓋並反複吹打裂解細胞。依據培養(yang) 板的麵積而不是依據細胞的數量來決(jue) 定所需的TriZol總RNA提取試劑量（每10cm2加1ml）。當TriZol總RNA提取試劑量不足時可導致抽提的RNA中汙染有DNA。

注意：

貼壁培養(yang) 細胞往往不能*從(cong) 培養(yang) 瓶（皿）脫落，這並不意味著裂解不*，此時細胞膜實際已經*破裂開，並已釋放出全部RNA，繼續做即可。

d. 細胞懸液：

離心收集細胞。在TriZol總RNA提取試劑試劑中用移液管反複吹打來裂解細胞。每5~10×10⁶的動物細胞，植物或酵母菌細胞或每1×107細菌加1ml的TriZol 總RNA提取試劑。在加入TriZol總RNA提取試劑前應避免洗滌細胞，因為(wei) 那樣會(hui) 增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和細菌可能需要使用勻漿器。

f. 血液：

使用TriZol 總RNA提取試劑Reagent LS。

2.將勻漿樣品劇烈震蕩後在室溫條件下放置5分鍾以使核蛋白體(ti) *解離。

3.可選步驟：

在4°C的條件下以12,000 rpm 的離心力離心10分鍾，取上清。

如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或肌肉，植物的塊莖結節等可離心去除。離心後的沉澱中包含有細胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織的樣品時，上層是大量油脂應除去。取澄清的勻漿液進行下一步。

4.每1ml TriZol 總RNA提取試劑加0.2ml 氯仿。蓋緊管蓋，劇烈震蕩15 秒並將其在室溫下放置2~3 分鍾。

5.在4°C 12,000 rpm的離心力高速冷凍離心10-15分鍾。離心後混合物分成三層：下層紅色有機苯酚氯仿層，中間層，上層無色的水樣層。RNA無一例外地存在於(yu) 水樣層當中。水樣層的容量大約為(wei) 所加TriZol總RNA提取試劑容量的50-60%。（有機層和中間層是蛋白和DNA，如果需要提取，請聯係我們(men) 索取提取方法）。

6.將水樣層轉移到一幹淨的離心管中，加入等體(ti) 積異丙醇。顛倒混勻後室溫放置10 分鍾。

RNA沉澱在離心前通常不可見，離心後在管側(ce) 和管底形成膠狀沉澱。

7.在室溫或者4°C 12,000 rpm 離心10 分鍾，棄上清。

8.加入75%乙醇洗滌沉澱。每使用1 ml TriZol 總RNA 提取試劑用1 ml 75%乙醇對沉澱進行洗滌。

9.在室溫或者4°C 12,000 rpm 離心3分鍾，棄上清，注意不要丟(diu) 失RNA沉澱。

注意：剩餘(yu) 的少量液體(ti) 可短暫離心，然後用槍頭吸出，注意不要吸棄沉澱。

10.室溫放置2-3分鍾，晾幹。加入30-100μl RNase free water，充分溶解RNA，得到的RNA 保存在-70℃， 防止降解。

注意：剩餘(yu) 的少量液體(ti) 可短暫離心，然後用槍頭吸出，注意不要吸棄沉澱。