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Product Center品牌 | LABLEAD | 貨號 | Y408102 |
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供貨周期 | 現貨 |
酵母營養(yang) 缺陷型培養(yang) 基配製
液體(ti) 培養(yang) 基:
8g粉狀培養(yang) 基LABLEAD係列選擇培養(yang) 基加950 ml水,常規高壓滅菌後再加50ml 40%過濾除菌的無菌葡萄糖。(備注:YPD、YPDA和YPD plus這三種係列不需要再加糖,直接按瓶子上標簽指示加水配製即可)。配製液體(ti) 培養(yang) 基不需要調pH,因為(wei) 酵母偏好酸性條件生長。如果為(wei) 了實驗方便,葡萄糖也可按2%的量以粉末的形式加進去高壓滅菌(見下麵標準配製法注解)。
固體(ti) 培養(yang) 基:
8g粉狀培養(yang) 基加950 ml, 用NaOH調pH至大致範圍5.8~6.5, 然後按20g/L加瓊脂粉, 高壓滅菌後再加預溫的50ml 40%無菌葡萄糖, 搖勻後傾(qing) 倒平皿(備注:如不調pH, 瓊脂在酸性條件下會(hui) 產(chan) 生崩解)。如果為(wei) 了實驗方便,葡萄糖也可按2%的量以粉末的形式加進去高壓滅菌。
標準配製法:
標準流程要求葡萄糖過濾除菌,因為(wei) 葡萄糖與(yu) 培養(yang) 基中的氨基酸在高溫高壓下發生化學反應。但有些實驗者為(wei) 方便起見,將固體(ti) 葡萄糖按2% 的量(按每升20克)直接加到培養(yang) 基後一起高壓滅菌,雖然酵母也可以生長,但一般不推薦這種將葡萄糖高壓滅菌的方法。如果實在要圖省事想用這種方法,那麽(me) 一定要控製好高壓時間在18-20min結束,待壓力下降和溫度降到安全範圍後應盡快取出。否則液體(ti) 顏色會(hui) 變成黃色而對酵母特性發生不可預知的影響。但半乳糖和棉子糖不能高壓滅菌,隻能用過濾除菌製備,建議製備高濃度40%的儲(chu) 存液,按計算好的體(ti) 積加到高壓滅菌的培養(yang) 基使得終濃度為(wei) 2%。
說明:
用於(yu) 組成型表達(如酵母雙雜交、酵母單雜交)以及其它采用組成型啟動子的實驗一般都加葡萄糖;誘導型表達如采用GAL1啟動子載體(ti) 的表達一般都加半乳糖和棉子糖。葡萄糖可以勉強高壓滅菌,但半乳糖和棉子糖是絕對不能高壓滅菌的, 應采用無菌過濾法先製備40%的無菌儲(chu) 備液,待不含糖的培養(yang) 基高壓滅菌後按最終應用濃度為(wei) 2%的量計算需要加入的無菌液體(ti) 糖儲(chu) 存液:
如配製1升培養(yang) 基則稱取8克培養(yang) 基加水950 ml,常規高壓滅菌(121°C 20min)完成後待溫度降至安全範圍70°C時趁熱立刻加入50ml 40%過濾除菌的無菌糖,充分混勻。