熒光標記鬼筆環肽555(橙紅)，鬼筆環肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。 它是特異性結合於F-肌動蛋白的雙環肽。因此用熒光染料標記的鬼筆環肽可以非常方便的研究F-肌動蛋白的分布。

熒光標記鬼筆環肽555(橙紅)

產(chan) 品貨號：G0060  

Abs/Em (nm)：555/565

存儲(chu) 溫度：-20℃幹燥、避光保存，有效期見外包裝。若配製成水溶液，應小量分裝保存。

注意事項

本產(chan) 品為(wei) 凍幹粉形式，微量不易觀察，使用前請瞬時離心，加適當溶劑溶解後使用，溶解後的溶液近乎透明色。

產(chan) 品簡介

鬼筆環肽是從(cong) 致命的傘(san) 形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。 它是特異性結合於(yu) F-肌動蛋白的雙環肽。因此用熒光染料標記的鬼筆環肽可以非常方便的研究F-肌動蛋白的分布。鬼筆環肽內(nei) 部，在半guang氨酸和se氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nei) 環結構。在pH升高時，該硫醚被裂解，鬼筆環肽失去對肌動蛋白的親(qin) 和力。

熒光標記的鬼筆環肽可在納摩爾水平染色F-肌動蛋白。在各種植物細胞或動物細胞中，標記的鬼筆環肽對大、小細絲(si) 具有相似的親(qin) 和力，平均每個(ge) 肌動蛋白亞(ya) 基結合一個(ge) 鬼筆環肽分子。不同於(yu) 抗體(ti) ，鬼筆環肽與(yu) 肌動蛋白的結合親(qin) 和力在不同物種間沒有顯著變化。非特異性染色可以忽略不計，染色和未染色區域之間的對比度非常大。鬼筆環肽將單體(ti) /聚合物的平衡轉向聚合狀態，將聚合臨(lin) 界濃度降低至30倍。Phallotoxins可通過抑製細胞鬆弛素的解聚， 碘化jia和升高的溫度，穩定 F-肌動蛋白，。因為(wei) 鬼筆環肽綴合物很小，大約直徑12-15埃，分子量<2000道爾頓，多種肌動蛋白結合蛋白，包括肌球蛋白，原肌球蛋白和後肌鈣蛋白依然可以和鬼筆環肽標記的肌動蛋白結合。更重要的是， 鬼筆環肽標記的肌動蛋白絲(si) 保持功能，標記甘油肌纖維仍然收縮，標記的肌動蛋白絲(si) 仍然可以繼續移動。而且熒光標記的鬼筆環肽也可用於(yu) 對細胞中 F-肌動蛋白進行定量研究。

實驗方法

儲(chu) 液製備

熒光染料標記的鬼筆環肽：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍幹的粉末，製備成200 T/mL的儲(chu) 液（300T規格染料加入1.5 mL的液體(ti) ，50T規格染料加入0.25 mL的液體(ti) 即可）。

熒光標記鬼筆環肽的一個(ge) 單位（T）的定義(yi) 是染色一個(ge) 加載細胞的載玻片所用染料的量。 對於(yu) 熒光標記的鬼筆環肽，使用時的推薦稀釋比例為(wei) 1:40-1:200，一個(ge) 單位相當於(yu) 200 μL總染色體(ti) 積中加入1-5 μL 200T/mL儲(chu) 備溶液。

注：稀釋比例可以根據實際染色效果進行適當調整。

固定細胞染色

以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或8孔室玻片上的貼壁細胞的染色步驟。鬼筆環肽也可用於(yu) 染色固定的冷凍或石蠟組織切片。

1. 用PBS清洗細胞3次。

2. 用含有3.75％甲醛的PBS溶液固定細胞，冰上固定15 min。

注意：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最好避免含有任何甲醇的固定劑。優(you) 選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3. 用PBS清洗細胞3次。

4. 用含0.5％Triton X-100的PBS溶液在室溫下透化細胞10 min。

5. 用PBS清洗細胞3次。

6. 用200μL PBS稀釋1-5 μL熒光標記的鬼筆環肽儲(chu) 液，加入一個(ge) 蓋玻片或孔中，室溫孵育20min，進行染色。

注：染色體(ti) 積可根據樣本情況進行調節。孵育過程中為(wei) 避免染液揮發，可將蓋玻片放於(yu) 密封容器內(nei) 。

7. 用PBS清洗細胞2-3次。

8. 熒光顯微鏡觀察。標記的鬼筆環肽具有很好的光穩定，樣品可以在PBS中成像，但為(wei) 了效果zui 佳，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察。

活細胞染色

熒光標記的鬼筆環肽不具有細胞透性，因此沒有被廣泛用於(yu) 活細胞標記。然而，有報道稱活細胞可能通過胞飲或未知機製進行標記。一般來說，染色活細胞時需要更多的染料。或者，熒光標記的鬼筆環肽也可被注入到細胞中用於(yu) 監測肌動蛋白分布和細胞運動。