Long Taq DNA Ploymerase。通過改變PCR用DNA聚合酶、PCR用Buffer、PCR擴增條件等，使長鏈DNA的擴增成為可能，這就是LA（Long and Accurate）PCR技術。本試劑盒所用的Long Taq是Taq聚合酶和有矯正作用的聚合酶的混合物，這種聚合酶可以染色體和其他細胞器的DNA為模板高效進行PCR反應。

  Long Taq DNA Ploymerase

貨號：LT0201

儲(chu) 存溫度：-20^。C，濃度5U/ul。

產(chan) 品組成、濃度

產(chan) 品介紹

一般PCR法具有一定的局限性，特別是難以擴增5kb以上的長鏈DNA，這嚴(yan) 重限製了PCR法的推廣和應用。通過改變PCR用DNA聚合酶、PCR用Buffer、PCR擴增條件等，使長鏈DNA的擴增成為(wei) 可能，這就是LA（Long and Accurate）PCR技術。本試劑盒所用的Long Taq是Taq聚合酶和有矯正作用的聚合酶的混合物，這種聚合酶可以染色體(ti) 和其他細胞器的DNA為(wei) 模板高效進行PCR反應。在人的染色體(ti) 上可以擴增長度可達27kb的DNA片段，而以λDNA為(wei) 模板則可擴增出高達40kb的片段。

適用範圍

一般用於(yu) DNA片段的PCR擴增、DNA標記、引物延伸、序列測定、DNA平末端加A等，產(chan) 物可直接用於(yu) TA克隆。

建議循環條件

*擴增大片段尤其是20kb以上的片段建議15-30個(ge) 循環，每個(ge) 循環的延伸時間要增加10-15sec“自動延伸"時間，如果PCR儀(yi) 器沒有“自動延時"功能，那麽(me) 設定延伸時間建議在原有基礎上增加1-4min。

注意事項：

1.10xLong Taq Buffer pH值較高，可能會(hui) 形成【Mg(OH)2】沉澱，使用蒨要充分溶解，並用Votex保證可能的沉澱重新溶解，或者37^。C溫育5min，然後Votex充分混勻。

2. 擴增長片段建議使用0.2ul薄壁管。其他試管未經測試。較厚的試管在92^。C時不能有效的使模板變性。變性時，盡可能縮短變性時間，降低變性溫度。第一步變性在92^。C-94^。C下進行2min（GC含量高可能延長時間達5min）。再循環過程中盡可能縮短變性時間（92^。C-94^。C下進行10-15s），除非模板中富含GC，則95^。C下變性30s，這可以防止DNA脫嘌呤和鏈斷裂，對於(yu) 所需擴增的基因組DNA片段中長度超過12kb時，應盡可能降低變性溫度和時間。變性需要的時間在不同PCR儀(yi) 上稍有不同。

3. 如果擴增片段GC含量高或者擴增片段比較長，可在反應混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%，zui常用2%（小於(yu) 30kb）或者4%（大於(yu) 30kb）往往會(hui) 改善擴增效果。

4. 擴增長片段，引物一般終濃度為(wei) 0.3-1uM，長度最好為(wei) 27-36bp；退火溫度一般在65^。C-70^。C，此時退火溫度和延伸溫度基本一致，可將退火延伸在一個(ge) 溫度進行，使用2階段擴增法。當然如果設計的引物在20bp左右，則還是使用傳(chuan) 統3階段擴增法。

5. 模板一般使用0.01-2.5ng(λ phage)或者0.1-1ug（human）。

6. 1xLong Taq buffer中Mg2+濃度為(wei) 2.5mM，建議dNTP濃度為(wei) 400mM，要得到最佳結果，優(you) 化Mg2+是必須的。如果含有較高的EDTA或螯合劑，則應該提高Mg2+；如果要增加dNTP濃度，相應的也要增加Mg2+濃度。