YF®647A-Annexin V和PI細胞凋亡檢測試劑盒提供了一種快速簡便的方法，通過標記早期凋亡細胞（遠紅）和壞死細胞（紅色），用於檢測細胞凋亡水平。產品可以使用流式細胞儀或其它熒光檢測設備進行檢測。

YF®647A-Annexin V/PI 細胞凋亡試劑盒

貨號：AF2021-100T

儲(chu) 存條件： 4℃避光冷藏，請勿凍存。

產(chan) 品組分

光譜特性

YF®647A-Annexin V：Ex/Em = 650/665 nm

PI：Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

產(chan) 品簡介

YF®647A-Annexin V和PI凋亡試劑盒提供了一種快速簡便的方法，通過標記早期凋亡細胞（遠紅）和壞死細胞（紅色），用於(yu) 檢測細胞凋亡水平。產(chan) 品可以使用流式細胞儀(yi) 或其它熒光檢測設備進行檢測。

YF®647A-Annexin V 可以標記凋亡細胞。Annexin V 選擇性結合磷酯酰si氨酸（phosphatidylserine，簡稱 PS）。在細胞發生早期凋亡時，磷酯酰si氨酸會(hui) 外翻到細胞表麵，即細胞膜外側(ce) 。用遠紅熒光探針 YF®647A 標記的 Annexin V，即 YF®647A-Annexin V，可以結合外翻的磷酯酰si氨酸，從(cong) 而檢測細胞凋亡的重要特征。 YF®647A 染料與(yu) 熒光素/FITC 相比，熒光亮度更高，且不受環境中 pH 的影響，具有良好的光穩定性。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種 DNA 結合染料，它可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪(sang) 失細胞膜完整性的細胞的細胞核。PI 可以由 488，532 或 546 nm 的激光激發，呈現紅色熒光。

使用方法

下列實驗方案以星形孢菌素誘導 Jurkat 細胞凋亡為(wei) 例。如果使用其他誘導劑和其他類型的細胞，實驗條件需要調整。

1．流式細胞檢測

（1）根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品，作陰性對照；一組樣品做單染，用於(yu) 調節補償(chang) 。

（2）收集細胞。

懸浮細胞：300 g，4℃離心5 min收集細胞；

貼壁細胞：用不含EDTA的yi酶消化後300 g，4℃ 離心5 min收集細胞，yi酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。

注：細胞用yi蛋白酶消化後，在最佳培養(yang) 條件和培養(yang) 基中恢複約30 min後染色，避免假陽性。

（3）用預冷的PBS洗滌細胞兩(liang) 次，300 g，4℃下離心5 min，收集1-5×10⁵個(ge) 細胞並用100 μL 1×結合緩衝(chong) 液重懸細胞。

（4）每管加入4-5 μL的YF®647A -Annexin V和5 μL的PI工作液。

注：推薦準備兩(liang) 管額外的細胞，每管隻加入一種單染染料 （YF®647A-Annexin V 和 PI），用於(yu) 流式單染的補償(chang) 調節。

（5）室溫避光孵育10-15 min，為(wei) 避免細胞凋亡進程，孵育過程可在冰上操作。

（6）每管加入400 μL的PBS或1×結合緩衝(chong) 液重懸細胞（PBS 或1× 結合緩衝(chong) 液的選擇根據不同凋亡處理以及不同細胞具體(ti) 選擇），盡快通過流式細胞儀(yi) 檢測細胞凋亡情況。 YF®647A-Annexin V可以由647 nm激光激發，檢測熒光發射光譜約在647 nm處（APC通道），PI發射光譜約在617 nm處。

2．熒光顯微鏡檢測

（1）將細胞接種在蓋玻片或載玻片小室中。

（2）根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品，作為(wei) 陰性對照。

（3）用PBS洗滌細胞。

注：可以用含血清的培養(yang) 基直接替代Annexin V結合緩衝(chong) 液，但是Annexin V的使用濃度需要重新優(you) 化。建議梯度測試。

（4）每100 μL的Annexin V結合緩衝(chong) 液中加入5-25 μL的 YF®647A-Annexin V和5 μL的PI。

注：最佳使用濃度由具體(ti) 實驗要求確定。

（5）向培養(yang) 板中加入足量的染液以覆蓋全部細胞，室溫避光孵育15-30 min。為(wei) 降低細胞凋亡進程，孵育過程可在冰上

操作，但孵育時間至少延長至30 min。

（6）用1×結合緩衝(chong) 液清洗細胞。

（7）將孵育有細胞的蓋玻片置於(yu) 載玻片上，載玻片可提前加一滴1×結合緩衝(chong) 液；對於(yu) 培養(yang) 在小室內(nei) 的細胞，可直接加入足量的1×結合緩衝(chong) 液覆蓋細胞。

（8）使用合適的濾光片在熒光顯微鏡下觀察細胞。 YF®647A-Annexin V 可用 APC 適用的濾光片，PI 可用 Cy3或者 Texas 濾光片。

注意事項

1. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2. 為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

3. 本產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研 。