BCA 蛋白定量試劑盒
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法。基於雙縮脲反應，即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+，產生一種紫藍色複合物，在562nm處有高的吸光值，該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。

BCA蛋白濃度測定試劑盒

貨號：B5001

存儲(chu) 條件：冰袋運輸。試劑盒中A、B液室溫或4℃保存；蛋白標準品（BSA）置於(yu) 4℃保存，有效期2年。

產(chan) 品規格：

BCA試劑A   100ml

BCA試劑B   3ml

蛋白標準品   2x1ml (5mg/ml)

PBS溶液     10ml

產(chan) 品描述

BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法。基於(yu) 雙縮脲反應，即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+，產(chan) 生一種紫藍色複合物，在562nm處有高的吸光值，該反應產(chan) 物的量與(yu) 蛋白質濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現了蛋白質濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為(wei) 用戶製作標準曲線提供了便利。該BCA蛋白濃度測定試劑盒可用於(yu) 比色皿法檢測，也可用於(yu) 微孔板法檢測。前者雖需較大量（100μL）的蛋白樣品，但由於(yu) 其在檢測中使用蛋白樣品與(yu) BCA工作液的比率為(wei) 1:20（v/v），從(cong) 而降低幹擾物質帶來的影響。後者操作簡單方便，僅(jin) 需少量（10-25μL）的蛋白樣品。不過，由於(yu) 其在檢測中使用蛋白樣品與(yu) BCA工作液的比率為(wei) 1:8（v/v），某種程度上限製幹擾物質的承受濃度以及降低最di檢測水平。

產(chan) 品特點

1）靈敏度高，最小檢測蛋白量可達0.2μg，檢測濃度下限達10μg/mL(在20~1000μg/ml 濃度範圍內(nei) 有較好的線性關(guan) 係）。

2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳(chuan) 統的Lowry法檢測速度約快4倍。

3）線性範圍廣，20-1000μg/mL濃度範圍內(nei) 有較好的線性範圍。

4) 不受大部分樣品中的化學物質的影響, BCA法測定蛋白濃度的最da優(you) 點是蛋白濃度的測定可以耐受高濃度的去垢劑, 可以兼容樣品中高達5%的SDS; 5%的Triton X- 100; 5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低於(yu) 10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低於(yu) 1mM; β-巰基乙醇低於(yu) 0.01%。

操作說明

BCA 工作液配製：

將試劑A和試劑B按照體(ti) 積比50:1比例混合配成BCA工作液。取50mL試劑A與(yu) 1mL試劑B混合，配成51mL BCA工作液。兩(liang) 者混合時會(hui) 有沉澱形成，徹di混勻後沉澱消失。

微孔板測定程序：（工作範圍 20-2000 μg/ml）

1. 蛋白標準品配製：室溫wan全溶解蛋白標準品， 取 20µl 5mg/ml BSA 蛋白標準溶液用 PBS 溶液稀釋至 100µl使其終濃度為(wei) 1.0 mg/ml。

2. 按照下表配製 BSA 標準測定溶液：

3. 將適當體(ti) 積的待測樣品加入到微孔板中，並用 PBS 補足到 20 µl

4. 向微孔板中加入200μL BCA工作液混勻, 37 ℃放置30分鍾； 注：也可以室溫放置2小時,或 60 ℃放置30分鍾。BCA 法測定蛋白濃度時,顏色會(hui) 隨著時間的延長不斷加深,並且顯色反應會(hui) 因溫度升高而加快。如果濃度較低, 適合在較高溫度孵育,或適當延長孵育時間。

5. 測定 562 nm處的吸光值， 並記錄讀數； 以不含BSA的樣品的光吸收值作為(wei) 空白對 照。

6. 以A562為(wei) 縱坐標, BSA含量為(wei) 橫坐標, 繪製標準曲線, 計算樣品中的蛋白濃度. 如果蛋白濃度不在標準曲線範圍內(nei) , 請稀釋樣品後重新測定。

試管測定程序：（工作範圍 20-1000 μg/ml）

1. 蛋白標準品配製：室溫wan全溶解蛋白標準品, 取150µL 5mg/ml BSA蛋白標準溶液,加入600μL PBS溶液稀釋至750µl，使其終濃度為(wei) 1.0 mg/ml。

2、按照下表配製 BSA 標準測定溶液：

3. 將適當體(ti) 積的待測樣品加入到試管中，並用 PBS 補足到100 µl；

4. 向試管中加入 2ml BCA 工作液，混勻，37 ℃放置30分鍾；

5 、6 步驟同上。

6. 注意事項

1）BCA蛋白測定法測定時顏色會(hui) 隨著時間的延長不斷加深，顯色反應的速度和溫度有關(guan) ，需注意保持定時和定溫，以確保精確定量。

2）長期保存，若發現BCA試劑A或者試劑B有沉澱發生。請37ºC溫育並伴隨攪拌促使其充分溶解。如發現細菌汙染，則應丟(diu) 棄。

3）實驗操作規範，提高上樣量的精確度。

4）每次測定都需做相應的標準曲線，因為(wei) 顯色反應與(yu) 溫度和時間的變化有關(guan) ，精準蛋白定量宜每次都做標準曲線。

5）本公司所有產(chan) 品僅(jin) 限用於(yu) 研發，必須專(zhuan) 業(ye) 人員操作同時佩戴口罩/手套/實驗服並遵守生物實驗室安全操作規程！