遺傳黴素(Geneticin)是一種結構類似於慶da黴素 B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷類抗生素，在分子遺傳試驗中，是穩定轉染zui常用的抗性篩選試劑。它通過抑製轉座子 Tn601，Tn5 的基因，幹擾核糖體功能而阻斷蛋白質合成， 對原核和真核等細胞產生毒素，包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞 ,也包括 原生動物和蠕蟲。

  G418 (Geneticin) 遺傳(chuan) 黴素

產(chan) 品貨號：G4180

儲(chu) 存溫度：常溫運輸。-20℃避光保存，有效期 3 年。避免受潮，否則會(hui) 降低抗生素活力。

產(chan) 品描述

G418是一種結構類似於(yu) 慶da黴素 B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷類抗生素，在分子遺傳(chuan) 試驗中，是穩定轉染zui常用的抗性篩選試劑，。它通過抑製轉座子 Tn601，Tn5 的基因，幹擾核糖體(ti) 功能而阻斷蛋白質合成， 對原核和真核等細胞產(chan) 生毒素，包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞 ,也包括 原生動物和蠕蟲。當抗性基因neo被整合進真核細胞基因組後 , ,則能啟動neo基因編碼的序列轉錄為(wei) mRNA，從(cong) 而獲得抗性產(chan) 物氨基糖苷磷酸轉移酶的高效表達，此酶通過共價(jia) 修飾 G418 的氨基或羥基功能，抑製抗生素-核糖體(ti) 間的相互作用，從(cong) 而使得抗生素失活。這一特性賦予細胞產(chan) 生抗性。穩轉細胞株篩選實驗，需要建立殺滅曲線（劑量反應曲線）確定殺死無抗性細胞的最di有效濃度。植物細胞中，通過轉染攜帶 nptII 基因的抗性質粒孵育其抗性。nptII 基因也能編碼表達氨基糖苷磷酸轉移酶，這個(ge) 酶使 得多種抗生素喪(sang) 失活性，包括 G418，卡na黴素和ba龍黴素。

產(chan) 品性質

英文別名（English synonym）	Antibiotic G418; G418 Sulfate
中文別名（Chinese Synonym）	G418 硫酸鹽；遺傳(chuan) 黴素
CAS號（CAS NO.）	108321-42-2
分子式（Formula）	C20H40N4O10·2 H2SO4
分子量（Molecular weight）	692.7 g/mol
外觀（Appearance）	白色粉末
純度（Purity）	>700Ug/mg
溶解性（Solubility）	溶於(yu) 水
結構式（Structure）

使用方法

1. G418 儲(chu) 存液的配製（50 mg/mL，活性濃度）

1）活力單位的換算 根據此公式進行換算：（1000/A0）×A1=A2，其中 A0是 G418 的

活力值（Potency），因批次而異。可見批次對應的質檢報告， 或者瓶子上的標簽。A1 是想配製的活性 G418 濃度。A2 是實際稱重的粉末與(yu) 體(ti) 積比濃度。 比如若所用批次的 G418

活力值為(wei) ：750 U/mg，要配製 50 mg/mL 的 G418 活性濃度，則實際要配製的粉末濃度為(wei) 1000/750×50 mg/mL=66.33 mg/mL。 如果配製 10 mL 的 G418 儲(chu) 存液（活性濃度，50 mg/mL），則需要稱取 663.3 mg 粉末。

2）除菌和保存 根據上述換算得到的實際粉末稱重量，加入 10 mL 無菌去離子水內(nei) 使其wan全溶解。 先用 5 mL 無菌去離子水預濕潤 0.22 μm 針頭式過濾器，除盡水。之後使用此濾器過濾，除菌後分裝成單次使用的小量（如 1mL）放到-20℃凍存，1 年穩定。                                                                  

【注】①不要對混濁的溶液進行過濾，因為(wei) 混濁的溶液意味著未wan全溶解，過濾過程中會(hui) 造成藥物損失，降低終液的活性。 ②不建議使用液體(ti) 培養(yang) 基，NaCl，磷酸鹽溶液或者有機溶劑來製備儲(chu) 存液。

2. 常用篩選濃度

一般來說，剛開始篩選轉化子需要高濃度的 G418，並用一個(ge) 較低濃度的 G418 用於(yu) 維持培養(yang) 。生長條件，細胞類型和其他 的環境因素都可能影響 G418 的用量，因此第一次使用的實驗體(ti) 係建議通過殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確 定最佳篩選濃度。 通常情況，哺乳動物細胞篩選範圍 200-2000 μg/mL；植物細胞：10-100 μg/mL；酵母細胞：500-1000 μg/mL；

以下是一些細胞類型使用 G418 篩選使用的濃度，可做參考。

3.殺滅曲線的建立

【注】為(wei) 了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素最di濃度，可通過建立殺滅曲 線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇 6 個(ge) 濃度。處理分裂期的細胞時 G418 的活性最qiang，因此在添加 G418 之前需 要讓細胞培養(yang) 一段時間。

1）第一天：未轉化的細胞按照 20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yang) 板上，37℃，CO2 培養(yang) 過夜；

【注】對於(yu) 需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）根據細胞類型，設定合適範圍內(nei) 的濃度梯度。以哺乳動物細胞為(wei) 例，可設定 0，50，100，200，400，800，1000 μg/mL。

3）第二天：去除舊的培養(yang) 基，換用新鮮配製的含有相應濃度藥物的培養(yang) 基。每個(ge) 濃度做三個(ge) 平行孔。

4）接下來每 3-4 天更換新的含藥物培養(yang) 基。

5）按照固定的周期（如每 2 天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是 7-10 天）內(nei) 能夠殺死絕大多數細胞的最di濃度為(wei) 穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

4. 穩定轉染細胞的篩選

1）轉染 48 h 後，用含有適當濃度的 G418 篩選培養(yang) 基來傳(chuan) 代細胞（直接傳(chuan) 代或者稀釋後傳(chuan) 代）。

【注】細胞處於(yu) 活躍分裂狀態時抗生素的殺傷(shang) 效果zui 好。則當細胞過於(yu) 稠密，其效率會(hui) 降低。為(wei) 了得到jiao好的篩選效guo，最 好將細胞稀釋至豐(feng) 度不超過 25%。

2）每隔 3-4 天更換含有藥物的篩選培養(yang) 液。

3）篩選 7 天後觀察並評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決(jue) 於(yu) 宿主細胞 類型，轉染，以及篩選效果。

4）挑取並轉移 5-10 個(ge) 抗性克隆於(yu) 35 mm 細胞培養(yang) 板，繼續用含藥物的篩選培養(yang) 液維持培養(yang) 7 天。

5）之後更換正常培養(yang) 基培養(yang) 即可。

注意事項

1）本品不可高壓滅菌；

2）G418不要和其他的抗生素/抗真菌劑（如qing黴素/lian黴素）共同使用，因為(wei) 它們(men) 是G418的競爭(zheng) 性抑製劑。其他的抗生素也 會(hui) 產(chan) 生交叉活性。

3）配製G418溶液時，一定要根據G418批次不同的活力值（potency）來進行換算，從(cong) 而得到需要活性濃度的儲(chu) 存液以及工作液。

4）G418加入培養(yang) 體(ti) 係中未轉染的細胞有可能不會(hui) 被殺死，原因在於(yu) 藥物濃度過低，或者細胞密度過高。另外，快速分裂的細胞相對於(yu) 緩慢增殖細胞，更容易被殺死。對照細胞（未轉染）可能抗生素添加5-7天後才能殺死，轉染細胞（抗性克隆子）的克隆需要10-14天形成。

5）即使加入殺死劑量的G418，細胞可能會(hui) 繼續分裂2-3次。G418的藥效通常在2天後才變得明顯。

6）為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。