Ni IDA Beads 4FF(鎳填料)屬於⼀類⾦屬螯合介質，以⾼流速瓊脂糖為基質，以次氮基三⼄酸（NTA）或亞氨基⼆⼄酸（IDA）為配基，並螯合⾦屬離⼦Ni2+⽽形成的⼀種親和層析介質。該親和介質不僅具有吸附容量⼤、選擇性好、分辨率⾼、超低限度的Ni2+泄露、易於再⽣、成本低等優點，還有利於保持產品的⽣物活性和提⾼產品的收率，從⽽⼴泛⽤於⽣物製藥和⽣物⼯程下遊蛋⽩質、核酸及多肽的分離純化。

Ni IDA Beads 6FF

產(chan) 品貨號：N30230

儲(chu) 存條件：2-8℃(20%⼄醇)

產(chan) 品簡介

LABLEAD的Ni親(qin) 和層析介質屬於(yu) ⼀類⾦屬螯合介質，以⾼流速瓊脂糖為(wei) 基質，以次氮基三⼄酸（NTA）或亞(ya) 氨基⼆⼄酸（IDA）為(wei) 配基，並螯合⾦屬離⼦Ni²⁺⽽形成的⼀種親(qin) 和層析介質。該親(qin) 和介質不僅(jin) 具有吸附容量⼤、選擇性好、分辨率⾼、超低限度的Ni²⁺泄露、易於(yu) 再⽣、成本低等優(you) 點，還有利於(yu) 保持產(chan) 品的⽣物活性和提⾼產(chan) 品的收率，從(cong) ⽽⼴泛⽤於(yu) ⽣物製藥和⽣物⼯程下遊蛋⽩質、核酸及多肽的分離純化，尤其是zu氨酸標記蛋⽩質的⾼效製備。

產(chan) 品特點

使用耐壓基質,可以耐受最高0.3M Pa的壓力，更穩定，因此該產(chan) 品更適合用於(yu) 工業(ye) 大規模蛋白的純化，可以在相對較高的流速下實現對目的蛋白的純化。

相關(guan) 數據

操作說明

Ni-IDA Chromrose 6FF可以在實驗室被填裝到中壓層析柱中，以擴大產(chan) 量。將填料填裝到層析柱中，根據樣本量和填料載量選擇合適的層析柱和柱高。

1. 緩衝(chong) 液準備

所用緩衝(chong) 液需要采用高純水配製，使用前建議用0.45um濾膜過濾。

平衡緩衝(chong) 液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，PH=7.4

漂洗緩衝(chong) 液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，10mM咪唑，PH=7.4

洗脫緩衝(chong) 液：500mM NaCl，20mM Tris-Hcl，500mM咪唑，PH=7.4

2樣品準備

為(wei) 了避免堵塞層析柱，樣品應經離⼼或微濾處理.進料量根據介質的載量和料液中⽬標蛋⽩的含量計算。

3樣品純化

（1）平衡：

⽤5~10CV的平衡緩衝(chong) 液平衡層析柱，⾄流出液電導和pH不變（與(yu) 平衡液⼀致）。對於(yu) 結合⼒較強的帶zu氨酸標記的蛋⽩質，平衡緩衝(chong) 液中可加⼊低濃度（20~40mM）的咪唑。

（2）進樣：樣品緩衝(chong) 液應盡可能與(yu) 平衡液⼀致。固體(ti) 樣品可⽤平衡液溶解配製；低濃度樣品溶液可⽤平衡液透析，⾼濃度樣品溶液可⽤平衡液稀釋。

（3）淋洗：上樣完畢後繼續⽤平衡緩衝(chong) 液淋洗⾄基線。

（4）洗脫：洗脫⼀般有兩(liang) 種⽅式，⼀是采⽤競爭(zheng) 試劑，例如咪唑（0~0.5M）、zu氨酸（0~0.05M）、氯化銨（0~2M）等將蛋⽩質從(cong) 柱⼦上置換下來；⼆是減⼩pH值，洗脫⽬標蛋⽩，⼤多數蛋⽩質在pH4~6的範圍內(nei) 可被洗下來。⽤競爭(zheng) 試劑咪唑或減小pH值的⽅法洗脫蛋⽩質，⾦屬離子仍結合在柱⼦上；若⽤競爭(zheng) 試劑zu氨酸或氯化銨洗脫蛋⽩質，會(hui) 將⾦屬離⼦和蛋⽩質的複合物⼀起洗下來。

注：

為(wei) 了減少雜蛋⽩在層析柱上的吸附，可在確保⽬標蛋⽩吸附的情況下適當增加樣品緩衝(chong) 液中的咪唑。對於(yu) 包涵體(ti) 蛋⽩，相應的可在平衡、上樣和洗脫的緩衝(chong) 液中加⼊8M Urea或6M Gua-HCl。

洗脫緩衝(chong) 液中必須加⼊0.15~1.0M NaCI，以消除離⼦交換作⽤。梯度洗脫最好在起始平衡液的恒定pH下進⾏，可采⽤線性梯度或階越式梯度洗脫。

（5）再生：介質使⽤數次（具體(ti) 與(yu) 樣品特性、樣品體(ti) 積、⾦屬離⼦等有關(guan) ）後，或者螯合其他⾦屬離⼦前，需要進⾏再⽣處理。⾸先⽤2~3 CV的0.1M EDTA和0.5M NaCl pH7.0清洗柱⼦，並⽤2~3CV以上的0.5M NaCl溶液清洗，除去主柱上殘留的EDTA，然後再螫合相應的⾦屬離⼦。若有變性蛋白質或脂類物質在再生過程中未能有效去除,可用原位清洗(CIP)的方法除去。

4原位清洗

為(wei) 了避免不同樣品間的相互⼲擾，或者當介質汙染⽐較嚴(yan) 重時（反壓增加），需要對介質進⾏在位清洗。在位清洗前，需要預先除去介質上螯合的⾦屬離⼦（⻅再⽣操作）。在位清洗時，可采⽤反向衝(chong) 洗的⽅法。

（1）對於(yu) 以離⼦鍵結合的蛋⽩，可⽤2~3CV以上的2M NaCl清洗，並⽤3CV以上的純⽔衝(chong) 洗。

（2）對沉澱蛋⽩、以疏⽔性結合的蛋⽩或脂蛋⽩，可⽤1M NaOH清洗（1~2h），並⽤3~10CV平衡液和3CV以上的純⽔衝(chong) 洗。

（3）對疏⽔性結合的蛋⽩、脂蛋⽩和脂類物質，可⽤5~10CV的70%⼄醇或30%異丙醇清洗（20min以上），並⽤3~10CV的純⽔衝(chong) 洗。

此外，也可⽤2CV含去汙劑的堿性或酸性溶液清洗。如⽤0.1~0.5%的⾮離⼦去汙劑+0.1M⼄酸衝(chong) 洗1~2h，並⽤5~10CV的純⽔衝(chong) 洗。