基質膠-標準型無酚紅，含有豐富的細胞外基質蛋白，主要包括層粘連蛋白、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長因子。基底膠在室溫條件下，聚合形成具有生物學活性的三維基質，模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能，有利於體外細胞的培養和分化，以及對細胞形態、生化功能、遷移、侵染和基因表達的研究。

標準型基質膠-不含酚紅

貨號：MG2237、MG4237、MG6237

存儲(chu) 條件：-80℃ 保存，避免反複凍融。

產(chan) 品簡介：

基質膠是從(cong) Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤提取的可溶性細胞培養(yang) 基質，含有豐(feng) 富的細胞外基質蛋白，主要包括層粘連蛋白、膠原IV、肝素硫酸酯蛋白聚糖、巢蛋白以及大量的生長因子。

基底膠在室溫條件下，聚合形成具有生物學活性的三維基質，模擬體(ti) 內(nei) 細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能，有利於(yu) 體(ti) 外細胞的培養(yang) 和分化，以及對細胞形態、生化功能、遷移、侵染和基因表達的研究。基質膠也適用於(yu) 類器官生長、分化、代謝和毒理學研究。高濃度的基質膠可以用於(yu) 動物體(ti) 內(nei) 成瘤實驗的細胞包被。

操作方法：

一、薄膠成膠方法：

1. 凍融後，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yang) 板置於(yu) 冰上，加入濃度為(wei) 50μL/cm² 生長麵積的基質膠。

3. 在 37℃放置 30 分鍾，即可使用。

二、厚膠成膠方法：

1. 凍融後，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。

2. 將需要使用的培養(yang) 板置於(yu) 冰浴，將培養(yang) 的細胞與(yu) 基質膠混合，用移液槍頭使其懸浮於(yu) 基質中。加入濃度為(wei) 150-200μL/cm

2 生長麵積的基質膠。

3. 在 37℃放置 30 分鍾，可成膠。可以加入細胞培養(yang) 的基質，也可使細胞直接生長在膠表麵。

三、薄層包被方法：

1. 凍融後，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。

2. 根據使用需要，采用無血清培養(yang) 基稀釋基質膠。根據實驗需要確定最佳包被濃度。

3. 將稀釋的 基質膠包被於(yu) 所需的培養(yang) 器皿中，包被量至少覆蓋整個(ge) 器皿的生長表麵。室溫下孵育 1 小時。

4. 去除未結合的基質膠，用無血清培養(yang) 基輕輕地衝(chong) 洗。

四、類器官培養(yang) 方法：

1. 用適量的4℃過夜解凍的基質膠重懸細胞或組織沉澱，推薦重懸密度為(wei) 每50μL基質膠懸液包含1X10^5細胞，重懸後可置於(yu) 冰上，重懸時間不超過30s以避免基質膠過早凝固。基質膠稀釋比例應在70%以上以保證培養(yang) 過程中基質膠的結構穩定性。

2. 將基質膠和組織細胞的混合懸液點入預熱的24孔板底部正中央，每孔30μL左右，避免懸液接觸孔板側(ce) 壁。為(wei) 防止基質膠室溫凝固，此步驟應盡快完成。

3. 將接種完成後的培養(yang) 板至於(yu) 37℃二氧化碳恒溫培養(yang) 箱中，孵育 15min 左右待基質膠凝固。

4. 待基質膠wanquan凝固後，沿壁緩慢加入類器官培養(yang) 基，24孔板每孔 500uL，避免破壞已凝固結構。

5. 將24孔板置於(yu) 37℃二氧化碳培養(yang) 箱中培養(yang) 。

6. 每 3 天更換一次培養(yang) 基，更換培養(yang) 基時應避免破壞基質膠。

五、胚胎幹細胞 ES 和誘導多能幹細胞 ips 培養(yang) （推薦使用hES驗證款基質膠）

1. 在冰上解融一份分裝的基質膠。

2. 在50 mL離心管中加入24 mL的預冷的DMEM/F-12，並且放在冰上。

3. 將解融的基質膠按一定稀釋比例（如1:100）加入到預冷的 DMEM/F-12中（在50 mL離心管中），混勻。

4. 稀釋好的基質膠溶液必須立即使用，進行培養(yang) 皿的包被。推薦的包被體(ti) 積參見下表。

5. 輕輕晃動培養(yang) 皿，將基質膠溶液均勻的覆蓋到培養(yang) 皿的表麵。

注意：如果培養(yang) 皿的表麵沒有被基質膠溶液wanquan覆蓋，則不能用於(yu) 人ES和iPS細胞培養(yang) 。

6. 培養(yang) 皿使用前至少在室溫(15 - 25°C)孵育1個(ge) 小時，不可使基質膠蒸發。

注意：如果不是立即使用，包被好的培養(yang) 皿必須密封防止基質膠溶液的蒸發，包被後可以在2 - 8°C放置一周。在使用之前，至少在室溫（15 - 25°C）中放置30分鍾恢複到室溫。

7. 輕輕的將培養(yang) 皿的一側(ce) 傾(qing) 斜，使多餘(yu) 的基質膠溶液在一側(ce) 的邊緣匯聚。通過移液器或者泵吸取多餘(yu) 的基質膠溶液。確保包被的表麵沒有被刮到。

8. 立即加入ES細胞培養(yang) 基（例如，6孔板每孔2 mL）。

注意事項：

1. 收到產(chan) 品並確認到貨情況無異常後，請將 基質膠儲(chu) 存於(yu) --80℃冰箱，短暫使用可置於(yu) --20℃冰箱。切勿將基質膠儲(chu) 存於(yu) 自動除霜的冰箱中。在第一次融化後請分裝保存，應避免基質膠反複凍融。

2. 因基質膠在 10℃以上即可成膠，在操作過程中，保持基質膠一直置於(yu) 冰上，所有接觸的細胞培養(yang) 器皿，移液吸頭，分裝管等都必須預冷後使用。

3. 所有操作均需在無菌環境下進行，試劑瓶瓶蓋可用 70％乙醇擦拭，並自然幹燥。應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀。

4. 溶解時可將基質膠基質置於(yu) 4℃冰箱內(nei) 冰上過夜溶解。成膠後基質膠可以在 4℃ 24－48 小時後重新呈液態。