熒光染料NO.33258用於DNA、染色體和核酸的染色；熒光染色法和免疫熒光技術。Hoechst 33258 是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 後釋放強烈的藍色熒光，對細胞的毒性較低

熒光染料NO.33258

產(chan) 品貨號：B2883-1

存儲(chu) 條件：−20℃ ，保質期3年

產(chan) 品描述

熒光色素；用於(yu) DNA、染色體(ti) 和核酸的染色；熒光染色法和免疫熒光技術。Hoechst 33258 是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 後釋放強烈的藍色熒光，對細胞的毒性較低。Hoechst 33258 常用於(yu) 細胞凋亡檢測，染色後用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀(yi) 檢測，也可以用於(yu) 普通的細胞核染色，或常規的DNA染色。

產(chan) 品性質

物理性狀

黃色至深黃色粉末；溶於(yu) 水，黃或棕色溶液，參考濃度為(wei) 9.80 - 10.20 mg/ml；熔點＞300℃。

用途

細胞遺傳(chuan) 學研究的常用試劑，熒光染色細胞的DNA ，插入DNA的A-T區，具有低的細胞毒性，形成膜滲透性熒光DNA鏈。用於(yu) 細胞核染色時，推薦的Hoechst 33258工作濃度為(wei) 0.5-10μg/ml。

配製母液

Hoechst 33258溶於(yu) 水，溶解度可達10mg/ml。因此可配製成10mg/ml的母液於(yu) 4℃避光保存。

注意事項

1) Hoechst 33258 對人體(ti) 有一定刺激性，請注意適當防護。

2) 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡量當天完成檢測。

3) 為(wei) 減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4) 為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。

5）本產(chan) 品僅(jin) 作科研用途！

使用方法     

1.用PBS或合適的緩衝(chong) 液製備10～50µM Hoechst 33258染色液。

2.固定的細胞或組織染色：

對於(yu) 固定的細胞或組織樣品，固定後，適當洗滌去除固定劑。隨後如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢後再按後續步驟進行Hoechst33258染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行後續的Hoechst 33258染色。

a)對於(yu) 貼壁細胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對於(yu) 懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體(ti) 積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鍾。

b)吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鍾。

c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片後熒光顯微鏡下觀察。激發波長350nm，發射波長460nm。

3.活細胞或組織染色：

a)細胞培養(yang) 物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細胞培養(yang) 基體(ti) 積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對於(yu) 六孔板一個(ge) 孔需加入1ml染色液，對於(yu) 96孔板一個(ge) 孔需加入100μl染色液。

b)在 37℃培養(yang) 細胞 10～20 分鍾。

c)用 PBS或合適的緩衝(chong) 液洗細胞兩(liang) 次。

d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片後熒光顯微鏡下觀察。激發波長350nm，發射波長460nm。