DiO (細胞膜綠色熒光探針) 是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合後其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數和激發態壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，最jia濃度時可以使整個細胞膜染色。

DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS細胞膜染料

產(chan) 品貨號：22066

存儲(chu) 條件：-20℃幹燥避光保存，有效期一年。

產(chan) 品描述

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親(qin) 脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與(yu) 細胞膜結合後其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數和激發態壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個(ge) 細胞膜上擴散，最jia濃度時可以使整個(ge) 細胞膜染色。它們(men) 的熒光顏色區分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR（深紅色熒光）這使得他們(men) 可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發，有著比DiI更長的激發波長和發射波長，在細胞和組織染色中更有價(jia) 值。DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在活體(ti) 成像中用來示蹤。 

使用方法

1. DiD， DiO，Di I，Di R和DiS細胞膜染色液製備

（1）配置儲(chu) 存液用DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

注意：未使用的儲(chu) 存液保存在-20℃，避免反複凍融。

（2）工作液製備：用合適的緩衝(chong) 液（如：無血清培養(yang) 基，HBSS或PBS）稀釋儲(chu) 存液，配製濃度為(wei) 1～5 µM的工作液。

注意：工作液的最終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配製。可以從(cong) 推薦濃度的十倍以上尋找最jia條件。

2.懸浮細胞染色

（1）懸浮細胞密度為(wei) 1 × 10⁶ /mL加入到工作液中。

（2）在37 ℃培養(yang) 細胞 2～20分鍾，不同的細胞最jia培養(yang) 時間不同。

（3）染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鍾。

（4）傾(qing) 倒上清液，再次緩慢加入預溫37℃的培養(yang) 液。

（5）重複（3），（4）步驟兩(liang) 次以上。

3.粘壁細胞的染色

（1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yang) 。

（2）從(cong) 培養(yang) 基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yang) 液，將蓋玻片放在潮濕的環境中。

（3）在蓋玻片的一⻆加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

（4）在37 ℃培養(yang) 細胞 2～20分鍾，不同的細胞最jia培養(yang) 時間不同。

（5）吸幹染料工作液，用培養(yang) 液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yang) 基覆蓋所有細胞，培養(yang) 5～10分鍾，然後吸幹培養(yang) 基。

4.顯微鏡檢測

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參考表1。

（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

a : DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b : DiI和DiD＝Omega XF92， Chroma 51007；

c : DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5.流式細胞儀(yi) 的檢測

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經典的FL1，FL2，FL3和FL4流式細胞儀(yi) 檢測。