Annexin V-PE細胞凋亡試劑盒可用流式細胞儀及或其他熒光檢測設備進行檢測。本試劑盒中提供的 RedNucleus II 是一種遠紅光染料， 屬於蒽醌類，與 Annexin V-PE 聯用時，RedNucleus II 被排除在活細胞和早期凋亡細胞外，而晚期凋亡細胞和死細胞則同時被 Annexin V-PE 和 RedNucleus II 結合染色呈現雙陽性。

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ細胞凋亡試劑盒

貨號：AF2022

儲(chu) 存條件:4℃避光冷藏，請勿凍存。Annexin V-PE 儲(chu) 存於(yu) 50 mM Tris, 100 mM NaCl, 1% BSA, 0.02% NaN3, pH 7.4 的溶液中。

光譜特性

Annexin V-PE：Ex/Em=488/578 nm RedNucleus II：Ex/Em=635/695 nm

產(chan) 品介紹

Annexin V 是一類廣泛分布於(yu) 真核細胞胞漿的鈣離子依賴性的磷脂結合蛋白。Annexin V 則選擇性的結合磷脂酰絲(si) 氨酸（Phosphatidylserine, PS），PS 在細胞正常狀態下是分布於(yu) 細胞磷脂層內(nei) 側(ce) ，即靠近細胞質，當細胞處於(yu) 早期凋亡階段，PS 會(hui) 從(cong) 細胞內(nei) 側(ce) 翻轉至細胞外側(ce) ，此時 Annexin V 可以與(yu) PS 結合，被紅色熒光染料 PE 標記的 Annexin V 作為(wei) 探針則會(hui) 在一定波長激發的情況下檢測出處於(yu) 早期凋亡狀態的細胞。對於(yu) 壞死細胞，由於(yu) 細胞完整性已經被破壞， Annexin V-PE 則可以進入胞漿與(yu) 處於(yu) 磷脂層內(nei) 側(ce) 的 PS 結合，從(cong) 而也使壞死細胞呈現紅色熒光。

本試劑盒中提供的 RedNucleus II 是一種遠紅光染料， 屬於(yu) 蒽醌類化合物，不能透過活細胞和早期凋亡細胞完整的細胞膜，是非滲透性的，但是可以快速染色死亡和透化細胞中的細胞核/dsDNA。RedNucleus II 是一種理想的碘化丙啶( PI )和7-AAD的替代物，與(yu) PE聯用，無需補償(chang) 調節，具有更好的光譜特性：不受紫外線的激發，也不與(yu) PE/PE 同係物重疊發射，故可以和 FITC，PE 及紫色熒光染料結合用於(yu) 多色分析。與(yu) Annexin V-PE 聯用時，RedNucleus II 被排除在活細胞和早期凋亡細胞外，而晚期凋亡細胞和死細胞則同時被 Annexin V-PE 和 RedNucleus II 結合染色呈現雙陽性。

Annexin V-PE/RedNucleus II 細胞凋亡檢測試劑盒可用流式細胞儀(yi) 及或其他熒光檢測設備進行檢測。

使用方法

1. 根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品，作為(wei) 陰性對照。

2. 沉澱細胞：對於(yu) 懸浮細胞：1000 rpm，離心 5 min。對於(yu) 貼壁細胞：用不含 EDTA 的胰酶消化後 1000 rpm，離心 5 min。胰酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。對於(yu) 特定的細胞，如果細胞無法*離心至管底，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50 μL 左右的培養(yang) 液，以避免吸走細胞。

注：用胰蛋白酶消化然後使細胞在最hao細胞培養(yang) 條件和培養(yang) 基中恢複約 30 min，然後再染色。胰蛋白酶消化會(hui) 暫時破壞質膜，允許 Annexin V 結合磷脂酰絲(si) 氨酸在細胞膜的細胞質表麵上，從(cong) 而導致假陽性染色。

3. 加入約 1 mL 4℃預冷的 PBS，重懸細胞，1000 rpm，離心 5 min。

4. 重複步驟 3。

5. 用 1×Annexin V 結合緩衝(chong) 液重懸細胞，調節其濃度為(wei) 1-5×106 細胞/mL。  

6.取100 μL的細胞懸液於(yu) 5 mL流式管中， 加入5 μL Annexin V-PE、5 μL RedNucleus II，混勻後於(yu) 室溫避光孵育15-20 min。

7.（可選步驟）準備兩(liang) 管額外的凋亡細胞，每管中隻加入一種單染染料（Annexin V-PE 或 RedNucleus II），用於(yu) 流式單染的補償(chang) 調節）。

8. 加入 400 μL 1× Annexin V 結合緩衝(chong) 液，混勻，進行流式檢測，Annexin V-PE 由 488 nm 激光激發，檢測熒光發射光譜在 578 nm 處（FL2 或 BL2 通道），RedNucleus II 由 638 nm激發，選擇 FL4 或RL1 通道檢測。

注意事項

1.熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.為(wei) 了避免洗滌細胞時損失細胞，在吸液時可以用大的Tip頭套上小的 Tip 頭吸液。

3.為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。