ECL超敏發光液 M
用於HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。具有以下特點：
(1)具有極gao靈敏度和高信噪比,可檢測ng水平；
(2)可在日光燈下進行發光操作；
(3)發光迅速,熒光可使X光膠片感光達12小時以上,特別適用於痕量蛋白或核酸檢測,淬滅時間長；
(4)可使用更高的抗體稀釋倍數(1:2000~1:10000),極其節省抗體；
(5)保存時間長。

ECL超敏發光液 M

產(chan) 品貨號：E1070

儲(chu) 存條件：4℃避光保存，一年有效。如果長期不用，可以-20℃保存。-20℃可以保存更長時間。

產(chan) 品簡介

用於(yu) HRP標記抗體(ti) 的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。具有以下特點：

(1)具有極gao靈敏度和高信噪比,可檢測ng水平；

(2)可在日光燈下進行發光操作；

(3)發光迅速,熒光可使X光膠片感光達12小時以上,特別適用於(yu) 痕量蛋白或核酸檢測,

淬滅時間長；

(4)可使用更高的抗體(ti) 稀釋倍數(1:2000~1:10000),極其節省抗體(ti) ；

(5)保存時間長；

使用說明

1、常規電泳、轉膜、HRP 標記抗體(ti) 或核酸探針孵育、洗膜。注意用 HRP 標記 IgG 或用一抗-鏈親(qin) 和素 -生wu素-HRP 夾心法。核酸雜交膜用 HRP 標記探針雜交，洗膜。

2、在最hou一次洗滌膜上的 HRP 標記二抗的同時，新鮮配製發光工作液：分別取等體(ti) 積的溶液 A 和 B 混合，放入幹淨容器中混合。建議立即使用工作液,室溫放置數小時後仍可使用但靈敏度略有降低。

3、用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝幹洗液但勿使膜*幹燥。將膜*浸入並與(yu) 發光工作液充分接觸（約 0.125ml 發光工作液/cm2 膜）。室溫孵育 3 分鍾後，準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會(hui) 增加靈敏度，有時還會(hui) 導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應，使用過少的發光工作液不利於(yu) 反應進行，也會(hui) 導致膜上 條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低。為(wei) 達節約目的可將膜剪小但勿降低發光液用量。

4、用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝幹發光工作液。但勿洗去發光液。

5、在 X 光膠片暗盒內(nei) 麵鋪一張麵積大於(yu) 膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包 裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多餘(yu) 的保鮮膜。用濾紙吸去多餘(yu) 的發光工作液。用膠帶將覆蓋 雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nei) ，最hao蛋白帶麵向上。

6、在黑暗中放入 X 感光膠片，分別曝光不同的時間如數秒到數分鍾。顯影衝(chong) 洗。

注意：

1、步驟 1-5 可在日光燈下操作；但發光液暴露於(yu) 強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作 可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的潔淨。

2、長時間曝光或蛋白質過量，將加深背景並使條帶強弱變化失去線性關(guan) 係。曝光不足則條帶模糊。

3、發光工作液孵育約 3 分鍾後膜上的條帶發光。強條帶發光在暗房中肉眼可見，低豐(feng) 度蛋白條帶發光 較弱，肉眼雖不可見但能使 X 膠片曝光。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發光時間。肉眼不可見的熒光實際上 可持續數小時並使 X 膠片感光，因而弱帶可曝光 1-10 小時。如果曝光後條帶不佳，可用洗膜緩衝(chong) 液洗膜， 重新孵育二抗，然後重新用 ECL 發光和曝光。

4、由於(yu) 超敏發光液的高靈敏度，強烈推薦大多數進口抗體(ti) 起始濃度為(wei) 一抗 1：1000-1：4000，二抗 1： 2000-1：5000。抗體(ti) 濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗！

5、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時會(hui) 淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜，例如“克林萊"牌保鮮膜。

6、使用肉眼可見的預染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標簽可幫助確定膠片上條帶的準確位置 和大小。

7、NaN3能抑製 HRP 活性，回收二抗時應避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%。

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