Flag-Agarose免疫沉澱試劑盒
基於基因工程改造的納米抗體開發的；納米抗體由傳統抗體的重鏈可變區（VHH）組成，具有分子量小、親和力高、特異性強，且耐酸堿高溫環境等特點；基於納米抗體的優點，LABLEAD的免疫沉澱beads避免了免疫沉澱結果出現輕重鏈汙染的現象，並且節省實驗時間。

Flag-Agarose 免疫沉澱試劑盒

貨號：PFA025

存儲(chu) 條件：-20°C保存，Flag-Agarose beads經常使用可在4℃保存，-80或-20℃長期保存，避免反複凍融。

試劑盒組分：

產(chan) 品簡介：

   LABLEAD的免疫沉澱beads是基於(yu) 基因工程改造的納米抗體(ti) 開發的；納米抗體(ti) 由傳(chuan) 統抗體(ti) 的重鏈可變區（VHH）組成，具有分子量小、親(qin) 和力高、特異性強，且耐酸堿高溫環境等特點；基於(yu) 納米抗體(ti) 的優(you) 點，LABLEAD的免疫沉澱beads避免了免疫沉澱結果出現輕重鏈汙染的現象，並且節省實驗時間。

實驗步驟：

提示：盡量在4℃進行操作，洗脫蛋白方法一除外。

1.植物組織裂解處理：

取適量植物組織樣本（葉片等）放置於(yu) 冷凍液氮中，之後將冷凍後得植物組織樣本放於(yu) 研缽進行研磨，盡可能充分研磨破壞其細胞壁。加入500-1000ul 裂解液A或裂解液B（需加入PMSF溶液）進行裂解，為(wei) 了提高裂解效率，可加入 200ul 玻璃粉按照600-800g離心力充分震蕩 30min，裂解完成後 12000 rpm，離心 30min，吸取上清置於(yu) 新的離心管中，棄去沉澱。（進行第3步）

2. 動物細胞

2.1 收集細胞：

根據實驗要求收集適量的細胞，通常每個(ge) 免疫沉澱反應大約使用 10⁶-10⁷ 個(ge) 細胞。

2.2 裂解細胞：

根據實驗要求選擇使用溶液A或溶液B裂解細胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑製劑，用500μl預冷的溶液A或溶液B重懸細胞；置於(yu) 冰上30分鍾，可每10分鍾充分吹打一次；細胞裂解物4℃，20,000g離心15分鍾，將裂解產(chan) 物（上清）轉移到一個(ge) 新的預冷管中，丟(diu) 棄沉澱。

3. 平衡珠子：

振蕩充分混勻珠子， 吸取20μl Flag-Nanoab-Agarose beads到500μl預冷的溶液A或溶液B中，4℃，2,500g離心2分鍾，丟(diu) 棄上清液。

4. 結合蛋白：

將平衡好的beads加入到細胞裂解產(chan) 物中，於(yu) 4℃旋轉混合結合30min-1h。

5. 清洗珠子：

根據實驗要求選擇使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃，2,500g 離心2分鍾，丟(diu) 棄上清液。用500μl預冷的溶液C或溶液D重懸beads，4℃，2,500g條件下離心2分鍾，丟(diu) 棄上清液並重複洗滌3次。

6. 洗脫蛋白

方法一：

加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸beads。95℃，加熱10min充分變性，2,500g離心2分鍾收集上清，收集的產(chan) 物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析。

方法二：

加入溶液E洗脫結合的蛋白，孵育時間30秒，期間不斷混勻，2,500g離心2分鍾收集上清，為(wei) 了中和酸性的甘氨酸，立即加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）。

注意：為(wei) 了提高洗脫效率可以重複這一步。收集的產(chan) 物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析。

注意事項：

1、關(guan) 於(yu) 裂解液與(yu) 裂解液的選擇：

裂解液A為(wei) 溫和裂解液，裂解液B為(wei) 強裂解液，請根據自己實驗樣本選擇相應的裂解液，如：若為(wei) 胞質蛋白可選裂解液A或者A與(yu) B混合使用，若為(wei) 核蛋白則可選擇裂解液B。

漂洗液C和漂洗液D的選擇：（裂解液D為(wei) 高鹽溶液，可能會(hui) 破壞蛋白間較弱的相互作用），若兩(liang) 個(ge) 蛋白相互作用強，同時還想減少非特異性結合，可選D；若兩(liang) 個(ge) 蛋白相互作用弱的優(you) 先C。

2、盡量避免過多的反複凍融。可以適當分裝後使用。

3、本產(chan) 品僅(jin) 供科研使用，不得用於(yu) 臨(lin) 床診斷或治療，不得用於(yu) 食品或藥品。

4、為(wei) 了您的安全和健康，請穿實驗服並戴一次性手套操作。